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标题: 免疫组化 [打印本页]

作者: 铁牛 时间: 2009-3-19 12:48 标题: 免疫组化

做免疫组化片的组织固定用什么对免疫组化影响最小？？？？
酒精？甲醛？

作者: firstraining 时间: 2009-3-19 18:58

中性甲醛固定液最好

作者: sunflower11111 时间: 2010-5-7 19:53

10%的甲醛固定

作者: Tony 时间: 2010-5-7 20:21

10%中性缓冲福尔马林

作者: 格言 时间: 2010-9-18 22:42 标题: 回复 4# 的帖子

如果单纯是做免疫组化，那用12%中性福尔马林比较好。

作者: shanghainese 时间: 2010-9-19 06:12

引用:

原帖由格言于 2010-9-18 22:42 发表
如果单纯是做免疫组化，那用12%中性福尔马林比较好。

道理呢?

作者: 6504339 时间: 2010-9-19 07:48

各有各优缺点
常用固定液：固定剂品种很多，但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同，各有优缺点。
-醛类（常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛）
-醇类（常用乙醇）
-其它（丙酮）
(1) 醛类
*甲醛(福尔马林)应用最广
-原理：形成分子间的交联，影响蛋白构型而使之固定。
-优点：形态结构保存好，且穿透性强，组织收缩少。
-缺点：
*甲醛放置过久可氧化为甲酸，使溶液pH降低，影响染色；
*醛基与抗原蛋白的氨基交联形成羧甲基，使抗原决定簇的三维构象出现空间障碍；
*分子间交联形成的网格结构可能部分或完全掩盖某些抗原决定簇，使之不能充分暴露。可造成假阴性的染色结果。
-注意事项：
*缩短固定时间，降低固定温度(4C)，为此组织块不宜过厚。
*改用中性缓冲福尔马林，以pH值7.2～7.4 0.01mol/L的磷酸盐缓冲液配制成10％甲醛固定液，减少固定液pH的变化。
*固定后充分水洗以减少分子间交联。
*切片在作免疫组化染色前，先经预处理使抗原再现(抗原修复)。

*戊二醛：
-穿透性强，微细结构保存好，但对抗原有一定影响，常与其他固定剂联合用作免疫电镜固定液。
*多聚甲醛(常用4%)：
-可用于免疫电镜；也可用于免疫荧光染色。
*主要检测组织内一些性能娇弱的抗原特别是细胞表面抗原，例如各类淋巴细胸分化决定簇(CD)、主要组织相容性抗原等。
(2) 醇类
* 最常用的醇类固定剂是乙醇。
-其固定作用：使细胞内蛋白、糖类发生沉淀。
-优点：穿透性强、抗原性保存好。
-缺点：
*脱水性强，易引起组织收缩、变硬，影响切片质量，因而乙醇固定时间不宜过长(2h内)。
*乙醇使蛋白变性的作用轻，固定后可再溶解；染色过程中，温育时间长，抗原可流失而减弱反应强度。
(3) 其它固定剂
*丙酮：
-对抗原性的保存好，但脱水性更强，较少用于组织标本，但细胞爬片常用丙酮固定。
3、抗原修复——原因
*常规的石蜡切片标本均用甲醛固定，结果使得：
-抗原性物质形成醛键、羧甲键而被封闭了部分抗原决定簇；
-蛋白之间发生交联而使抗原决定簇隐蔽。
*要求：在染色时，需要先进行抗原修复或暴露，即将固定时分子之间所形成的交联破坏，而恢复抗原的原有空间形态。

作者: shanghainese 时间: 2010-9-19 11:47

引用:

原帖由 6504339 于 2010-9-19 07:48 发表
各有各优缺点
常用固定液：固定剂品种很多，但大多属于醛类和醇类。其固定原理不同，各有优缺点。
-醛类（常用甲醛、戊二醛和多聚甲醛）
-醇类（常用乙醇）
-其它（丙酮）
(1) 醛类
*甲醛(福尔马林)应用 ...

是您自己写的? 还是丛书上抄下来的?

作者: 格言 时间: 2010-9-19 21:26 标题: 回复6

在日常工作中由于10%福尔马林受到福尔马林的质量、使用时的挥发和取材时带入水分的影响，浓度容易被降低致组织固定不足，而高浓度的福尔马林，降低了对组织的穿透性，形成周围固定好而中央固定不到的现象。所以可以适当的增加福尔马林的浓度。当然从规范角度出发，还是应该使用10%中性福尔马林。

作者: shanghainese 时间: 2010-9-19 23:54

引用:

原帖由格言于 2010-9-19 21:26 发表
在日常工作中由于10%福尔马林受到福尔马林的质量、使用时的挥发和取材时带入水分的影响，浓度容易被降低致组织固定不足，而高浓度的福尔马林，降低了对组织的穿透性，形成周围固定好而中央固定不到的现象。所以可以适 ...

好!
可以写一篇论文.

作者: konvict6924 时间: 2017-6-6 08:23

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