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标题: 请教诸位前辈关于小鼠胃的脱水浸蜡 [打印本页]

作者: antidiseases 时间: 2009-3-21 16:03 标题: 请教诸位前辈关于小鼠胃的脱水浸蜡

我要做小鼠胃的石蜡切片，但是片子总是坏掉，主要表现为切片后组织与周围包埋蜡脱开；烘干片子后发现组织发白，碎裂翘起。恳请前辈们指点迷津。我在脱水浸蜡前会把胃切成四段，分别放在不同的框内脱水。目前我用的脱水程序如下，我们实验室使用的是莱卡的全自动脱水浸蜡机。
70%酒精 20 min
80%       20
95%       20
95%       20
100%    20
100%    20
二甲苯1 15
二甲苯2 20
蜡1          20  61度    真空加压交替
蜡2          30  61度    真空加压交替
蜡3          30  61度    真空加压交替

感谢各位前辈！！！

作者: 中威先生 时间: 2009-3-21 16:46

有没有固定?脱水时间太短!
70%酒精 120 min
80%       60
95%       60
95%       60
100%    60
100%    60
二甲苯1 25
二甲苯2 20
蜡1          10 65度    真空加压交替
蜡2          120  65度    真空加压交替
蜡3          30 65度    真空加压交替

作者: antidiseases 时间: 2009-3-21 16:55 标题: 回复 2# 的帖子

取胃时我用ＰＦＡ灌洗消化道，然后再ＰＦＡ中过夜固定的。
我尝试一次您给的程序，多谢您的解答！

作者: cz古典古 时间: 2009-4-6 21:27

没有固定好

作者: 6504339 时间: 2009-4-10 16:43

脱水时间太短！我们这边小鼠组织脱水浓度都是从50%开始的！

作者: 黄树叶 时间: 2009-5-22 21:29

你们大机器只有11个缸吗？我是搞人体病理的，可能不怎么理解你们的方向，我是觉得固定和脱水都不好，也不知道你们取大组织块大小，如果向碎米大小而已，那脱水大时间应该是可以的，但是如果是大块组织，脱水时间和“二楼”大差不多，70%大不用那么长也行的。
1.5X1X1cm 就要1个小时左右大时间了。还有我建议在脱水之前，我觉得应该再放固定液里泡2个小时（石蜡减少1缸，多一缸固定液也可以吗？）。

作者: jiaguotao 时间: 2009-5-23 17:58

前面几位同仁都提到了脱水，很有道理的，这都是常识！我再加一句，浸蜡的时候不要“真空加负压”，组织损伤明显知道吗？！

作者: dingwei 时间: 2009-5-25 14:22

最根本的问题是固定不好，导致组织脱水不佳，对小鼠来说，这样的脱水时间差不多，最主要是不要在ＰＦＡ中过夜，放在10%福尔马林中过夜试一下。

作者: qibaomeimei 时间: 2009-7-6 23:34

取材太厚不好固定。我之前整个胃的做不好后来把它瓜分了，就挺好的了

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