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标题: 免疫组化修复液的选择 [打印本页]

作者: 大大世界 时间: 2009-6-16 19:15 标题: 免疫组化修复液的选择

请问大家，我们科室选择的修复液是柠檬酸缓冲液，你们选择的修复液是什么？
我从网上看到说采用碱性修复液EDTA pH8.0或EGTA pH9.0)进行修复效果比柠檬酸好，不知道有人用过吗？这是真的吗？

作者: 大大世界 时间: 2009-6-16 19:21 标题: ER.PR

请问大家做ER.PR的时候有什么小窍门吗？乳腺疾病做ER.PR时，虽然结果是阳性，但是大部分是（+～++），有时候还会出现（—+），效果并不是每次都理想。我们用的是迈新的即用型抗体，做的步骤没有错误，我总是找不出问题所在。希望各位老师能提点我一下，谢谢！

作者: 依米花 时间: 2009-8-29 19:04

帮你顶顶帖，也有就有专家回复了哦。

作者: 依米花 时间: 2009-8-29 19:06

不同的抗体要求修复液是不一样的。好多科室都是2种修复方式并用的哦。。我有个客户之前用的柠檬酸修复，后来换EDTA了，效果比柠檬酸好很多很多了哦。

作者: dingwei 时间: 2009-9-27 15:30

周小鸽老师说：EGTA pH9.0效果最好，他们一直用。我们没用过，也想试一下。

作者: klgxy 时间: 2009-10-21 13:32

抗原修复技术条件的选择

临床与实验病理学杂志 2000年第1期第16卷中山园地

　　我们有幸成为跨世纪的见证人，信息时代对我们每一个人都提供了更多的机会和挑战。为此北京中山生物技术有限公司和临床与实验病理学杂志编辑部联合推出“中山园地”，愿她成为友谊的纽带，连结所有的病理工作者，使我们成为真正的朋友；愿她成为前进的桥梁，横跨医学技术的现在和未来，为您的事业助一臂之力，欢迎大家赐稿，谢谢各位的关注!

北京中山生物技术有限公司研发部

　　组织在福尔马林或其它固定液中固定会引起位于蛋白内或蛋白间的亚甲基桥的桥连，引起许多抗原决定簇被封闭。如在组织切片前未进行某种形式的抗原修复，免疫染色结果将不能令人满意甚至不能成功。最常用的抗原修复技术是酶消化和热引导的抗原决定簇的修复(heatinduced epitope retrieval,HIER)，但其它技术，如声波处理抗原修复技术也在某些实验室应用。有些抗体则适宜于几种抗原修复技术的联合使用，如酶消化加HIER可使anti-calponin抗体的染色效果最佳。有关抗原修复的基本要素如下：
　　1　足够的抗原修复是影响免疫组化染色结果最重要的因素，总的说来，较检测系统更为重要。
　　2　尽管某种形式的抗原修复对大多数抗体有益，但有些抗体经抗原修复后不再发生反应(例如某些不需要抗原修复的抗体)。
　　3　主要的抗原修复形式包括：
　　。酶处理，如：胰蛋白酶、胃蛋白酶、pronase
　　。热引导的抗原决定簇修复，使用湿热。HIER对大多数的抗体有益，特别是核抗原(对它们来说，HIER可能是抗体工作的前提条件，如Ki-67、雌激素)。
　　4　某些抗体适宜于几种抗原修复方法联合使用，如anticalponin抗体经酶处理及HIER联合修复后抗体工作效果最佳。
　　5　抗某一抗原的不同抗体可能需要不同的抗原修复方式，如有些抗CD21的抗体可能需要酶消化，而另一些则需要HIER。
　　6　使用HIER时，要注意两个基本点：
　　。抗体孵育前每一步操作均勿使组织干燥，否则免疫反应可能完全不能进行。
　　。加热后放置足够的时间(至少10～20 min)使之变凉是必需的，可假设为允许蛋白恢复到它的自然结构，否则HIER将无任何效果。
　　目前常见的抗原修复液，如：枸橼酸缓冲液、尿素、EDTA、Tris-HCl、氯化铵和商品化靶修复液。作者选择压力锅HIER方法，结果表明在pH8.0 1 mmol/L EDTA溶液中修复的效果最佳，特别是与常用的枸橼酸缓冲液(pH6.0)比较。
　　有人认为EDTA-HIER的作用机制是通过钙离子的鳌合而实现的，而且这种鳌合作用只有在碱性pH值下才起作用(注意：枸橼酸缓冲液作用似乎也是通过钙离子的鳌合而实现的，并且也是在高pH值下工作的效果最好)。形成于hydromethylene、羧基及磷酸基团间的钙离子配体复合物通过空间排列的障碍作用，封闭了抗原决定簇的位点。因此去除了钙离子即打碎了混合物。然而，对于酸性的抗原修复液，如Tris-HCl，抗原修复似乎是通过高浓度的氢离子离解了钙离子复合物或打断了福尔马林固定产生的交联而实现的。
　　如果一个实验室想将枸橼酸缓冲液换为EDTA溶液作为抗原修复因子，大多数抗体的稀释度将被提高，这就是说，每个抗体的稀释度将要重新估测。这样不仅可以节省抗体，而且可使免疫染色更加稳定。pH值(碱性范围)非常重要，因为对有效的抗原修复来说，pH值似乎比抗原修复液的化学成分更为重要。对大多数抗体，抗原修复液全范围pH值均使HIER进行有效的修复，而对某些抗体，(如：Ki-67、ER)，中间范围的pH值(3.0～6.0)会降低染色的强度，高于或低于此临界带均使染色强度增强。
　　极少数抗体(CD34、HMB45)，用HIER时，在低pH值(1.0～2.0)下染色效果不好，在高pH值下的染色效果极佳。因此，尽管pH值6.0的枸橼酸缓冲液可使大多数抗体良好地工作，但不可能总是工作良好。作为通用的修复液，碱性pH值的修复液远较枸橼酸缓冲液有效，而固定了很长时间或是非常旧的档案资料，酸性pH值的抗原修复液的工作效果优于碱性pH值的修复液(包括EDTA)，因此在通用抗原修复液不能进行免疫染色或染色效果不佳时，酸性抗原修复液可作为替代物。

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