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标题: 全部掉片 [打印本页]

作者: guting2006 时间: 2009-7-8 08:42 标题: 全部掉片

请教大家一下，今天做的免疫组化片子都掉光了，我用的是1mM EDTA（PH8.0）抗原修复液，配方为：EDTA 0.3722g 蒸馏水1000ml　用NaOH调节至PH8.0，急，谢谢。

作者: shanghainese 时间: 2009-7-8 12:32

用superfrost plus microscope slides 就不会掉片了。

作者: guting2006 时间: 2009-7-8 20:26

哦，那配方上没有问题吧？谢谢您了，是不是不用这种片子就是会掉啊？再次感谢。

作者: fangdang 时间: 2009-7-9 11:21

主要是组织片粘附和组织脱水的问题

作者: shanghainese 时间: 2009-7-9 12:37

引用:

原帖由 guting2006 于 2009-7-8 20:26 发表
哦，那配方上没有问题吧？谢谢您了，是不是不用这种片子就是会掉啊？再次感谢。

配方没错。最好再加一点Tween 20。

EDTA Buffer  (1mM EDTA, 0.05% Tween 20, pH 8.0):

   EDTA (Sigma, Cat# E-5134) ----------- 0.37 g

   Distilled water -------------------------- 1000 ml

   Mix to dissolve. Adjust pH to 8.0 using 1N NaOH. Then add 0.5 ml of Tween 20 and mix well. Store this solution at room temperature for 3 months or at 4 C for longer storage.

作者: shanghainese 时间: 2009-7-9 12:40

引用:

原帖由 fangdang 于 2009-7-9 11:21 发表
主要是组织片粘附和组织脱水的问题

同意 fangdang的看法。组织脱水不好很容易掉片。

作者: 冰雪 时间: 2009-7-12 13:59

如果固定的不是很好,也容易掉片

作者: guting2006 时间: 2009-7-13 12:02

谢谢大家，我回去再用好的片子试试

作者: guting2006 时间: 2009-7-17 16:52

还是掉光了，已经用了最好的片子了。会不会是PH值的问题啊？我用的PH试纸，有可能不是很准。谢谢

作者: guting2006 时间: 2009-7-20 16:17

还有，shanghainese老师，为什么要加吐温20呢？吐温20不是冲洗的吗？这样不是掉的更厉害了吗？

作者: 小越橘 时间: 2009-11-15 21:17

可能是组织切片不够平整,或者切的厚了,一般切2-3微米,还有你修复的方式是否正确,温度和压力,在达到高压喷气时要将火力调至最小再定时2min,另外要用涂胶片,有种进口的静电阳离子吸附的片子是最好的,很难掉片

作者: zhaojian 时间: 2009-11-16 18:42 标题: 我怀疑组织处理脱水有问题

主要是看组织的固定处理要及时，脱水要彻底，切片不能太厚，3-4微米，用防脱处理的切片捞片，一要平整防止气泡和皱褶，烤片温度65-70度两个小时。抗原修复时注意喷气后把火力调低，只要维持喷气就行。
互相讨论学习！！

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