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标题: 脑组织的冰冻切片 [打印本页]

作者: 优雅转身1230 时间: 2009-7-13 12:34 标题: 脑组织的冰冻切片

各位老师，我最近在做大鼠海马的冰冻切片，用于免疫荧光组化。我买的一抗要求不能用多聚甲醛而要用丙酮固定。现在的问题是：
1，不能用多聚甲醛灌注，那我只用生理盐水灌注可以吗？（如果不灌注我担心会有很多血细胞影响观察）
2，取出脑组织后可不可以不经甲醛浸泡，直接用蔗糖梯度脱水？（如果不用蔗糖脱水，用或不用生理盐水灌注后，取出脑组织直接投入液氮会不会比较容易产生冰晶或者切片的时候容易碎片？如果用蔗糖脱水，因为之前没有用多聚甲醛固定，会不会破坏脑组织的正常形态？）
3，脑组织从液氮取出后直接切片还是放在-20℃冰箱复温一段时间再切？（因为有人说温度太低，切的时候也容易碎片）
4，切片后如果不马上用，按以下顺序保存可以吗：切片——立即放入4℃丙酮固定15分钟——将切片从丙酮中取出，室温30分钟晾干——放入0.01PBS配制的60%的甘油中——至于 -20℃冰箱中保存。

作者: shanghainese 时间: 2009-7-14 12:14

1，可以生理盐水灌注。（减少血细胞对观察的影响）。
2，取出脑组织后直接用OTC包埋液氮冻。
3，冻后的组织快放在-80℃冰箱中保存或直接切片。
4，切片后如果不马上用，按以下顺序保存可以吗：切片——立即放入4℃丙酮固定15分钟——将切片从丙酮中取出，室温30分钟晾干——放入 -80℃冰箱中保存。

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