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标题: 求助：急：大鼠肺脏的冰冻切片 [打印本页]

作者: 2417zhanghl 时间: 2009-7-26 01:14 标题: 求助：急：大鼠肺脏的冰冻切片

各位老师好！当时取材时，直接将大鼠肺脏装入冻存管中，然后放入液氮，后-80度冰箱中保存，现在做冰冻切片，可以做么？有什么需要注意的么？上周我取出一块肺脏，先放于-20度冰箱过夜，然后4度冰箱约15分钟，再用OCT包埋，置于-20度冰箱中，OCT凝固后切片，6um厚。买ROCHE公司的TUNNEL试剂盒进行染色，安照其说明书操作，最后封片镜下观察，发现肺片开裂了很多口，有些地方没有细胞，像缺了一块。不知哪位老师能帮下小弟，谢谢。

作者: 6504339 时间: 2009-7-27 17:37

组织冰晶化了！冰晶化产生是含水叫多的组织中的水分在缓慢冷却当中凝固结冰破坏组织结构，组织应该在从-20度取出后迅速冷冻包埋切片，将切片固定后放入4度冰箱保存，快速冷冻可以减少冰晶化程度，或者将组织放入高浓度蔗糖溶液过夜，减少组织水分。

作者: 2417zhanghl 时间: 2009-7-28 01:08

请问，是将组织从-20度取出后直接放入高浓度蔗糖溶液过夜么

作者: 6504339 时间: 2009-7-28 10:09

是在液氮速冻前，我们是一般是用前一个方法来减少冰晶化的

作者: jiaguotao 时间: 2009-7-28 17:22

-20度过夜，可不要啊！就如冬天也能将湿衣服晾干一样——脱水了！组织细胞收缩明显，易碎，有裂隙是常事的。建议新鲜组织速冻立即切片！

作者: 6504339 时间: 2009-7-28 17:45

引用:

原帖由 jiaguotao 于 2009-7-28 17:22 发表
-20度过夜，可不要啊！就如冬天也能将湿衣服晾干一样——脱水了！组织细胞收缩明显，易碎，有裂隙是常事的。建议新鲜组织速冻立即切片！

我们是保存在 -80度的冰箱

作者: 2417zhanghl 时间: 2009-8-7 16:39

哦谢谢各位老师

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