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标题: 急问：肥大细胞的染色 [打印本页]

作者: haidan 时间: 2009-7-30 20:22 标题: 急问：肥大细胞的染色

请问一下~~~~肥大细胞有哪些染色方法~~具体染料的配制怎样？

作者: 6504339 时间: 2009-7-30 20:40

A液：甲苯胺蓝1.0g溶于80ml蒸馏水中。
B液：高锰酸钾0.6g溶于20ml蒸馏水中。
将已溶解的A液煮沸10min，然后将已溶解的B液逐滴加入A液中，文火煮沸10min，使甲苯胺蓝充分氧化，以增强染色力，用蒸馏水补足至100ml，待自然冷却后过滤，并调pH值至1.0。
染色步骤为：切片脱蜡复水后入染液30秒，蒸馏水洗两次，每次3～5min，90%酒精分色，在镜下控制分色时间，以肥大细胞异染颗粒呈紫红色为宜。

作者: 6504339 时间: 2009-7-30 20:44

吖啶橙原值区分组织细胞DNA和RNA的荧光组织化学染色法
(1)0．1％吖啶橙浓缩液(避光，4℃保存)
吖啶橙 0．1g
双蒸水 100ml
(2)0．067mol／L磷酸盐缓冲液(pH 6．0)
双蒸水 90ml
磷酸氢二钠(Na2 HP04·12H20)    0．34g
磷酸二氢钾(KH2P04)          0．78g
NaCl                         0．89g
完全溶解后加双蒸水至100ml；
(3)固定液：选用Carnoy或乙醇固定液；
(4)吖啶橙工作液：用前配制，吖啶橙浓缩液与PBS比为l：9；
(5)0．1mol／L氯化钙；
(6)1％醋酸。

作者: 6504339 时间: 2009-7-30 20:46

3)固定液：选用Carnoy或乙醇固定液；
(4)吖啶橙工作液：用前配制，吖啶橙浓缩液与PBS比为l：9；
(5)0．1mol／L氯化钙；
(6)1％醋酸。
2．操作程序
(1)石蜡切片按常规脱蜡处理．冰冻切片直接进行步骤(2)；
(2)1％醋酸液中轻轻洗6—30秒；
(3)蒸馏水洗2次，每次2～3分钟；
(4)PBS漂洗2分钟：
(5)吖啶橙工作液染色3一15分钟；
(6)PBS漂洗2次．每次3～5分钟；
(7)0．1mol／L氯化钙液中分化30秒，若切片厚，分化时间可延长至核界限清晰为止；
(8)用PBS彻底漂洗，除去氯化钙；
(9)水溶性封片剂封片，荧光显微镜观察分析。
结果：细胞核或DNA病毒包涵体呈绿色荧光．而核仁和细胞质内RNA或RNA病毒包涵体呈橘红色荧光。另外，可见组织中肥大细胞的颗粒和软骨基质中的酸性粘多糖以及嗜碱性和嗜酸性颗粒等发红色荧光．中性颗粒呈橘红色荧光，血管弹性纤维发**荧光。角蛋白呈绿色荧光，观察时应注意区别。

作者: haidan 时间: 2009-7-30 21:26

非常感谢~~~

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