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标题: 冰冻切片不要固定过程 [打印本页]

作者: 中中中 时间: 2009-9-8 13:47 标题: 冰冻切片不要固定过程

冰冻切片要不要固定过程？

所有的专业书都说冰冻切片要固定，但在实操工作中本人认为，固定并非十分必要。原因有：
固定时间太短，冰冻诊断时间总共30 分钟，切片和染色只有15分钟，诊断15分钟。而固定速度为8微米/每小时，有较果吗？。所以,冰冻切片不固定直接染色,可否？不各位前辈有否做过对比试验，是如何做的，可否节省这宝贵的5分钟给诊断。

[ 本帖最后由中中中于 2009-9-8 13:49 编辑 ]

作者: Tony 时间: 2009-9-8 22:02

固定后染色效果会好些

作者: jiaguotao 时间: 2009-9-9 17:55

“可否节省宝贵的5分钟给诊断”？
5分钟？宝贵？
为了5分钟，你如果制作切片不合格，出了事情，就不止5分钟甚至50天能解决的了！
宝贵不宝贵，不是区区5分钟所能决定的，碰到疑难冰冻，切片诊断困难，你就是给他节省好几个5分钟，也未必能够发出很明确的结果，何来“宝贵”二字？
不能因小失大，此事咱们技术员以制作优质的冰冻切片为重，时间是越短越好，当然更不能偷工减料！固定与不固定在镜下的对比不是很明显，但是实践工作中有很多事情要碰到地！
脱片，自溶，是不可避免的！
那么是不是需要固定呢？
不言而喻！

作者: 中中中 时间: 2009-9-9 18:46

引用:

原帖由 jiaguotao 于 2009-9-9 17:55 发表
“可否节省宝贵的5分钟给诊断”？
5分钟？宝贵？
为了5分钟，你如果制作切片不合格，出了事情，就不止5分钟甚至50天能解决的了！
宝贵不宝贵，不是区区5分钟所能决定的，碰到疑难冰冻，切片诊断困难，你就是给他节 ...

言重了，一切的尝试当然是要在可控的范围内进行，并须要有大量的数据支持，我们尝试了几例肌瘤的，不固定染色较果好明显优于固定的切片，也没见到细胞结构的明显破坏，可能是因为，暴露在空气中的时间足够短吧，但实验的病例不多，不知前辈可有尝试。有实验才有发言权。

再者我认为技术与诊断不应各自为政，相互推诿。不知兄然否？。

组织固定的目的是防止自溶和变性，如果时间短到组织来不及自溶和变性，然则固定又有何意义?.请大家商榷。

[ 本帖最后由中中中于 2009-9-9 18:51 编辑 ]

作者: 6504339 时间: 2009-9-9 22:24

不怕一万就怕万一！

作者: 中中中 时间: 2009-9-10 18:55

[ 本帖最后由中中中于 2009-9-13 17:50 编辑 ]

作者: 郑 时间: 2009-9-12 00:57 标题: 冰冻切片应固定

固定的作用有:1防止组织自溶和变性;使组织定性定形;2固定有媒染的作用可使组织产生不同的折光率;3不固定的组织细胞遇水会变性

作者: dingwei 时间: 2009-9-12 07:52

引用:

原帖由 中中中 于 2009-9-8 13:47 发表
冰冻切片要不要固定过程？

所有的专业书都说冰冻切片要固定，但在实操工作中本人认为，固定并非十分必要。原因有：
固定时间太短，冰冻诊断时间总共30 分钟，切片和染色只有15分钟，诊断15分钟。而固定速度为8微 ...

冰冻切片当然要固定。固定就是要保证组织的形态和成份，主要看核的结构，染色质要清晰可见。
只是你的操作本身就非常错误，所以感觉不出固定的效果。
冰冻切好片应该立即把切片放入甲醇、95%酒精或丙酮等固定液中固定。而不是在空气中干燥后再固定。空气中干燥后的细胞核退变，成毛玻璃样，看不清染色质。
固定时间其实只要10-20秒，根本不需要5分钟。

作者: jiaguotao 时间: 2009-9-15 16:48

我只是记得上学的时候应该固定，实习的时候应该固定，上班了还在固定！
必须的，以后当别人问的时候，还是告诉他们要固定，而且必须及时！

作者: 中中中 时间: 2009-9-20 10:53

试试吧，或许还会发现青霉素。

作者: jiaguotao 时间: 2009-9-21 15:54

楼上的你的“试试吧”，干封还是湿封？
如果干封也能写出其优点，可以发表此文章了！
如果您还是干封，“青霉素”真不好发现，有时候“太执着”了不好！

作者: 中中中 时间: 2009-9-25 20:40

很失望，人人都在强调书上如何如何。
难道顺手切一张对照片看一眼有这么难吗！！！！

作者: scncoyzh 时间: 2009-10-9 23:33

我弱弱的问一句：各位老师，不固定的话，切片染色出来不会出现冰晶吗？

作者: dingwei 时间: 2009-10-10 09:19

引用:

原帖由 中中中 于 2009-9-25 20:40 发表
很失望，人人都在强调书上如何如何。
难道顺手切一张对照片看一眼有这么难吗！！！！

不难，十年前刚开始做冰冻时就是这样做的。后来经过反复实验，证明这个方法是错误的。难就难在你从没有做过好的片子，就分不清什么是好什么是差。执着地坚持错误，比什么都不懂的人更可怕。

作者: 中中中 时间: 2009-10-12 22:38

事实上我是想说，冰冻片行固定程序，是多此一举，

权威说不行，我也认了，

不管如何，我们实行了大半年，约200多例，效果显著。蟹就蟹吧.

[ 本帖最后由中中中于 2009-10-12 22:51 编辑 ]

作者: 中中中 时间: 2009-10-12 22:41

引用:

原帖由 scncoyzh 于 2009-10-9 23:33 发表
我弱弱的问一句：各位老师，不固定的话，切片染色出来不会出现冰晶吗？

冰晶只会出现在过度冰冻（冰冻太长时间、温度太低或降温过程太长）的情况下。

作者: dingwei 时间: 2009-10-12 22:44

权威说了不算，你也可把冰冻切片的图放上来，大家看看到底好不好。

作者: dingwei 时间: 2009-10-12 22:50

引用:

原帖由 中中中 于 2009-10-12 22:41 发表

冰晶只会出现在过度冰冻（冰冻太长时间、温度太低或降温过程太长）的情况下。

冰晶的产生是因为冷冻速度慢，细胞内和细胞间的水分向疏松区域凝聚，形成冰（冰晶），解冻后成为空洞。冷冻速度越快，冰晶越少。

作者: scncoyzh 时间: 2009-10-21 21:38

引用:

原帖由 中中中 于 2009-10-12 22:41 发表

冰晶只会出现在过度冰冻（冰冻太长时间、温度太低或降温过程太长）的情况下。

那么，固定不是为了使细胞保持形态结构吗？及时的固定不是避免产生冰晶的方法吗？我觉得冰晶的产生不全是温度过低这些，还有切片机内的切片后，拿出来后和外面的空气温差过大，暴露在空气中时间太长，才产生的，如果错误，请各位老师指正，先道声谢谢！

作者: dingwei 时间: 2009-10-22 09:32

固定只是为了保持细胞形态，拿出来后和外面的空气温差过大，暴露在空气中时间太长都不会产生冰晶。内外温差大会产生细胞收缩，而不是冰晶；暴露在空气中时间太长，会引起细胞氧化、退变也不是冰晶。

作者: jl157710390 时间: 2009-10-22 09:51

受益匪浅！

作者: jiaguotao 时间: 2009-10-23 14:20

引用:

原帖由 dingwei 于 2009-10-10 09:19 发表
不难，十年前刚开始做冰冻时就是这样做的。后来经过反复实验，证明这个方法是错误的。难就难在你从没有做过好的片子，就分不清什么是好什么是差。执着地坚持错误，比什么都不懂的人更可怕。

丁老师的严肃就像老师教育小学生似的！不过确实说在了点上！

作者: scncoyzh 时间: 2009-10-28 21:20

引用:

原帖由 dingwei 于 2009-10-22 09:32 发表
固定只是为了保持细胞形态，拿出来后和外面的空气温差过大，暴露在空气中时间太长都不会产生冰晶。内外温差大会产生细胞收缩，而不是冰晶；暴露在空气中时间太长，会引起细胞氧化、退变也不是冰晶。

谢谢丁老师指点！谢谢！

作者: 郑 时间: 2009-10-29 21:21

欢迎创新.但不要违背常识而误入歧途

作者: ChenRong 时间: 2009-12-4 20:30

看看这个
http://bbs.dingw.com/thread-9668-1-1.html

作者: gpnasa 时间: 2010-5-7 08:55 标题: 超赞同老师意见。

引用:

原帖由 dingwei 于 2009-9-12 07:52 发表

冰冻切片当然要固定。固定就是要保证组织的形态和成份，主要看核的结构，染色质要清晰可见。
只是你的操作本身就非常错误，所以感觉不出固定的效果。
冰冻切好片应该立即把切片放入甲醇、95%酒精或丙酮等固定液 ...

我科就是这样做的，挺好！

作者: 燕燕于飞 时间: 2010-5-19 23:29

我原来是生理的技术员，阴差阳错变成了病理的技术员，但是说实在话，病理的技术员是要有理论和实践的。做好不容易。我很喜欢这个平台，是听朋友介绍的。现在我准备考病理技术师，我也觉得这行有意思。

作者: siliang420 时间: 2010-7-22 01:51

居然有人问出这种问题！7L正解，LZ你还是好好看看固定的作用吧。

作者: siliang420 时间: 2010-7-22 01:59

顶丁老师，我以前做冰冻的时候也是发现经常有冰晶出现，尤其是脑组织。由于当时我们科室有液氮，所以后来我就改成直接把标本放液氮里冻下然后切，液氮冷冻速度极快，0.1S就足够了呵呵，后来再没有出现过冰晶现象，所以说要使组织不出现冰晶，就是要速冻。哪怕你冻过头，在机箱中放置等它解冻就OK。原理就如丁老师所说，整个过程最好不要和外界空气接触

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