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标题: 对规范化的一点看法 [打印本页]

作者: dingwei 时间: 2009-11-12 13:44 标题: 对规范化的一点看法

现在，什么都提规范化，很多专家认为，只要厂家提供成品的试剂，照着做，就是规范化；用机器做就是规范化；搞几个操作流程，记录记录就是规范化，常规切片、免疫组化都是如此。个人认为，这些提法并不十分正确。
什么叫规范化：比如苏木素，每个人配出来效果都不一样，染色时间也不一样。然后，厂家就说，我们来配。厂家配出来就一样了吗？我相信一定也不一样，因为苏木素的配制和温度、时间、苏木素批号、氧化程度等等都有关系，就算你配出来是一样的，存放时间不一样，使用的气温不一样，切片的厚度不一样，染色时间都不一样。是不是用了厂家配的就是规范化了，就能用一个时间来规定就染好了？不会。其实说白了，是很多技术员懒，不愿意配而以。因为99%的情况下，厂里配的和你配的没区别，因为染色时间都不能固定，区别只是时间长短而以。那什么叫苏木素染色规范化？我认为，苏木素染色完成后必须用显微镜观察细胞核的深浅，并根据镜下的实际情况决定是否需要再染或分化，这才是规范化。
免疫组化存在的问题更多，有人提出来即用型抗体就是规范化。是不是这样的？就目前来说是不一定：即用型抗体的出现，推动了免疫组化在中国的普及化，为什么，因为中国的技术员素质低，不会配试剂，不愿配试剂，怕麻烦，现在也是如此。最好只要几种液体滴滴，免疫组化就做好了。即用型抗体正好满足了他们的要求，也正是这种宣传和教育，导致现在的很多技术员不懂什么叫稀释比，不懂一抗浓度与检测系统的敏感性是有相关性的。只知道买来按说明书做就行，结果是否正确也不知道。其实，这把中国病理技术员给害了。因为现在的免疫组化结果做出来五花八门，毛病很多就出在即用型抗体、出在技术员没有正规的培养和正确的思路，更没了解决问题的办法。用抗体原液的技术员都知道：一抗的浓度和检测系统的敏感性是要相互配合的：比如ER，用SP试剂盒，一般在1：80，用EnVision要1：50，用ChemMate EnVision 1：150 ，用PV9000 1：130；否则，就会出现假阳性（上背景）或假阴性（阳性细胞少）等等。然而，现在的试剂公司，它的即用型一抗只有一种浓度，然而它有多种检测系统，我不知道他们配的一抗是和那一个检测系统相匹配的，他们用不同的检测系统去适应同一种浓度的抗体，所以很多（应该说非常多）的单位做出来的结果都存在问题。更不要说还有不同的修复方法，不同的修复液，其强度都是不同的。
那什么叫规范化，我认为只有根据操作流程，在用不同的一抗稀释比，根据你的抗原修复方法、使用的检测系统、DAB敏感度相匹配，用强弱不同的组织做阳性、阴性对照做出的结果，那才叫规范化。而且，每次新进不同批号的抗体都要做对照（我们叫摸抗体稀释比、摸条件）。
有人说我们单位小，买不起原液，我告诉你，那是厂家忽悠你的，他们要朝三暮四的理论骗了你。因为稀释液的利润远远高于原液。他们没有告诉你，原液可保存几年，而稀释液只有半年左右。越是小单位偶尔用一下，越是要买原液，因为稀释液你可能用一次没就用了，原液买来放着，几年还能用。当然，一年内买几只抗体你可能觉得买稀释液便宜，但如果你根据原液的稀释比算一下，会发现二三年以后，你就上当了，因为稀释液要贵得多。
那么厂家应该怎么做？他们应该规定抗原修复方法和检测系统，然后选择一种与其相对应浓度的一抗，这样比较科学。目前，免疫组化机器染采用的就是这个模式，当然并不是简单使用配套试剂就一定能做出好的结果，机器也要根据染色强度用孵育时间来调整。手工的话那就更复杂了，但最起码正确率会高的多。免疫组化基础的原理和知识你必须懂，片子必须会看，抗原表达在那必须知道，最好知道什么肿瘤会表达，什么不会表达，出了问题应该知道问题在那儿、怎么解决。否则，你将永远是一个操作工。一个不懂诊断的技术员，一定成不了一个优秀的技术员。
所以，规范化不是我们想的那么简单，是科学地、认认真真地去做每一件事。

作者: zhww626090 时间: 2009-11-12 22:00

我非常赞同丁老师的观点，规范化不是什么大生产化，大机械化，有时大生产化生产出的染液不如我们自己配出的染好用，因为他也受时间因素的干扰如苏木素的配制，时间长了还存在过氧化问题。手工配置染液，就需要质量控制问题，指控好了，不管配制什么样的染液染出的片子都是优质切片，这就是规范化。

作者: 痞子张 时间: 2009-11-12 22:08

同意丁老师的看法
就像冰冻比赛一样，大家不要计较结果，奖项怎么样，我觉得规范一下我们的操作，技术水平提高是我们的主要目的！！

作者: colin 时间: 2009-11-22 20:02

各地更是难统一，谁能说他现在做的免疫组化就是完全正确的呢？

作者: fzxd888 时间: 2009-11-23 15:24 标题: 也谈规范化

就电镜固定液配置来说，目前确实有一些标准的配方，但是，不同生物的生活环境不同，而要求的固定液渗透压也不尽相同，比如海洋生物，淡水生物和陆生生物，其组织细胞生活环境的组织液渗透压有很大的不同，这样，就不能用单一配方的固定液进行固定。我们也碰到过一些海洋生物样品的固定，由于采用了常规固定液配方而导致细胞肿胀破坏现象的发生，而用与海水等渗的溶液进行配置，就没有上述问题的出现。因此，规范化也是有条件的。再者，目前市面上也有人出售所谓的标准固定液，但是，如果过了保质期，也就失效了，根据我们的经验，固定液存放时间不应该超过3周时间，最好在1周内使用。

作者: 熊成勇 时间: 2009-11-27 08:17

一抗的浓度和检测系统的敏感性是要相互配合的：比如ER，用SP试剂盒，一般在1：80，用EnVision要1：50，用ChemMate EnVision 1：150 ，用PV9000 1：130；否则，就会出现假阳性（上背景）或假阴性（阳性细胞少）等等。然而，一家公司：比如迈新公司，它的即用型一抗只有一种浓度，然而它有6、7种检测系统，我不知道他们配的一抗是和那一个检测系统相匹配的，他们7、8种检测系统配一种浓度的抗体，所以很多（应该说非常多）的单位做出来的结果都存在问题。
上面的问题每个医院或公司的SOP 里面应该注明，要不为什么还叫标准操作规程。不同的技术员作出的效果不一样，那sop就不能生效，也不合格。还有像试剂生产商，就不应该让他继续办下去。
在美国，别人为什么都不出现这种问题。

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