MALLORY 磷钨酸苏木精染色及其应用（转载）
在显示心肌、骨骼肌的肌纤维主要结构及病变时, M allo ry 磷钨酸苏木精(pho shangst ic acidHematoxylin, PTAH) 染色是常用的一种结缔组织染色法, 此法不但能清晰地显示正常肌纤维的横纹,同时还能显示其它多种组织成分, 特别在尸检工作中应用较普遍。
11PTAH 染色机制
在PTAH 染液中只含苏木精一种染色剂, 在磷钨酸参与下, 经氧化成熟后能将不同组织及正常与异常部分染成蓝色和棕红色两种不同的颜色。M allo ry 在最初并未阐明PTAH 染色反应原理, 但其方法仍符合现代组织化学的基本理论PTA 酸根基团中存在着许多空间, 而这些空间和分子对应部分是PTA 2H 形成螯合物的重要位置。在PTAH 染液中, 苏木精与钨原子的结合十分缓慢, 只有当苏木精氧化成熟后转变为苏木红(Haemu tein) 才能形成大量的PTA 2H 螯合物, 苏木红通过与钨结合生成蓝色色淀, 这种色淀选择性的与所要显示的组织成分牢固结合而呈蓝色。显示棕红色的成分为磷钨酸而染色[1 ]。Pearse 在对PTAH 染液的纸色谱分析中确定了染色剂主要含有三个主要成分, 一个分离良好的蓝带各连续的红和黄带[2 ]。从而证明了PTAH 染液的多色性, 横纹肌的A 带及纤维素被染成蓝色, 间质结缔组织呈浅红色, 胶原纤维、网状纤维等呈粉红色或棕红色, 细胞核、弹力纤维呈紫蓝色。
21 组织的固定与染色效果
作PTAH 染色的组织以含有铬盐或汞盐的Helly、Znke 固定液固定染色********, 但需流水冲洗过夜以除去多余的重铬酸盐或用碘除去汞色素。我们在工作中采用10% 福尔马林或AA F (乙醇-醋酸- 福尔马林) 液固定, 收到了同样的染色效果,减少了除铬、除汞等步骤。
31 染色前的氧化及漂白处理的意义
染色前用高锰酸钾氧化, 草酸漂白处理组织切化, 能对染色起到很好的作用, 背景更清晰。高锰酸钾是强氧化剂, 作用是清除组织切片上残留的有机物, 草酸具有较强还原性的有机酸, 能使高价锰离子还原成低价锰离子, 使组织切片达到无色、洁净, 并能促进组织与染料的亲和力, 增强染色作用。处理后的组织切片染色清晰, 肌纤维纹理清楚(附
图) , 不处理者则染色模糊, 结构不清。
41 染色时间
PTAH 染色时间因组织成分的不同, 所用固定液和固定时间的长短而异, 含甲醛固定的组织要比含铬盐和汞盐固定的组织染色时间要长, 一般在12～ 36 h。若采用加温或微波辐射的方法来促进染色,可明显缩短染色时间[3 ]。
51 染色后的处理
在PTAH 染液染色后不要用水洗组织切片, 水洗会减弱染色色泽, 使颜色变得浅淡而不鲜艳, 应用95% 乙醇快速洗去多余染液, 若颜色偏浅可返回PTAH 染液中延长染色时间。
61PTAH 染色应用
在显示与区分横纹肌纤维的正常及异常形态时, 正常肌纤维的横纹显示得非常清楚, 如发生颗粒变性和肌原纤维变性的心肌纤维结构不清晰或消失, 肌浆内出现蓝色的收缩带或因块, 对诊断心肌早期病变有一定参考价值。如早期缺血缺氧的肌纤维着深紫蓝色或黄棕色, 其纹理模糊不清或消失。在肌纤维发生水肿所致的混浊肿胀时, 其肌原纤维特
别是横纹则纹理不清。对弥漫性小血管内凝血的诊断具有意义, 即使非常少量的纤维素形成也可在毛细血管内发现蓝色纤维素细丝, 从而证明有无凝血发生。在横纹肌瘤, 横纹肌肉瘤和含有肌母细胞的混俣性中胚叶肿瘤的瘤细胞能染出蓝色横纹, 对诊断和鉴别某些肿瘤有所帮助。
此文转载于《中国组织化学与细胞化学杂志》2001 年12 月
作者：胥维勇 杨 红 李 科 杨 群 董丹丹
作者单位：四川省人民医院病理科, 成都 610072
