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新手求免疫组化步骤

新手求免疫组化步骤

本人刚参加工作一年,刚才浏览本站真的是很受教育,,我们这里技术都是师徒模式,,技术没有出去进修一说,记得刚开始老技术员告诉我的免疫组化过程是:(1)早上上班烤片(在电炉子上烤,时间控制完全凭经验,就是看到蜡烤化,在不烤糊这之间),(2)二甲苯3个,每个脱蜡15分钟。(3)用热水冲洗二甲苯(就是烧开的热水2个缸每缸30秒)。(4)蒸馏水冲洗3遍(每张片子覆盖蒸馏水后就甩干,中间没有间歇时间,后面水洗和PBS冲洗同此过程)。(5)滴加过氧化氢10分钟,蒸馏水洗3遍(师傅的解释是增强免疫组化的上色)。(6)高压修复(先将柠檬酸在高压锅里加热至沸腾,然后将切片置于锅内,个人觉得从片子放入锅内到高压锅喷气至少需要4-5分钟),高压锅喷气后2分钟。然后高压锅迅速放入自来水下冲洗2分钟左右,然后室温冷却。(7)PBS冲洗3遍,滴加相对应的一抗室温3小时左右(上午工作结束)(8)下午上班PBS冲洗3遍滴加二抗室温20—30分钟。(9)PBS冲洗滴加3抗室温20—30分钟,PBS冲洗。(10)滴加DAB染液3—5分钟,自来水冲洗。(11)苏木素复染4分钟,盐酸酒精分化,氨水反蓝,4个梯度酒精,3个二甲苯,封片。我们这里2002年就已经开展了免疫组化。这个步骤一直沿用至今。今年我将滴加过氧化氢放在高压修复之后滴加,烤片70度,烤2——3小时,其余步骤不变,请各位老师能否给一个标准的免疫组化步骤?

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效果如何?(个人觉得有好多不妥的地方)

[ 本帖最后由 xkj2797xkj 于 2011-8-28 14:47 编辑 ]
(本观点纯属本人意见!仅供参考!)

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大家可以自由发表评论。

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用热水冲洗二甲苯可能会减少酒精对组织抗原的损害,但是二甲苯能洗的干净吗?

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水跟二甲苯不是不互溶吗?能冲洗干净?

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四楼五楼两位朋友的问题问得非常好。谢谢!

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这种操作是非常错误的,从烤片开始就应该改正,难道你们温箱都没有吗?使用二甲苯脱蜡又为什么要用热水呢?我真的不明白,免疫组化部分影响不是很大,但是在免疫标记前的步骤必须改正

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酒精没二甲苯会对组织抗原有影响?那儿看来的?有没有实验证明?你和用热水比较过吗?
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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二甲苯脱蜡后不用酒精脱二甲苯吗?直接从二甲苯到热水?
免疫组化效果稳定吗?

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那么大家说了半天,有没有标准的免疫组化染色步骤呢?

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