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求教 Ki-67老是做不出来 别的都做的很好

求教 Ki-67老是做不出来 别的都做的很好

步骤如下: 烤片 1小时 70° ,
                 3缸 二甲苯 每缸5分钟
                然后过酒精  自来水冲洗
                抗原修复  高压修复 冒气计时 2分半  自然冷却
                PBS 3次 3分钟/次   
                 然后加一抗  放4°冰箱  
               下午2点半 把标本放37°恒温箱 45分钟  
                 PBS冲洗3次 二抗   室温 20分钟
                  PBS冲洗3次 DAB显色 3分钟  复染

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一抗37℃一小时,或4℃过夜。

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哪家公司?
哪个克隆?
抗体浓度是多少?

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迈新的   单克隆   抗体是即用型的

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高压修复是用的PH9.0的EDTA吗?为什么放4度冰箱呢,我们现在是室温,因室温只有20度,在中午的时候放37度温箱90分钟,二抗也是37度温箱30分分钟。

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回复 4# 的帖子

我们也是用迈新公司的,单克隆,浓缩抗体,一直以来都挺稳定的。没有发现什么异常。

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引用:
原帖由 samchen6073@sin 于 2012-2-16 23:33 发表
迈新的   单克隆   抗体是即用型的
请您看看您用的抗体是哪个克隆名。

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KI-67有些克隆号的抗体很难做出来,最好用edta修复,并且延长孵育时间,否则阳性率很低,甚至全阴性

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我科用上海长岛的即用型,效果不错,PH9.0的EDTA煮沸修复,一抗4度冰箱过夜或37度烤箱2-3小时都可以。

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67是有点麻烦,

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