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请教各位老师,ki-67始终做不出来。

请教各位老师,ki-67始终做不出来。

步骤如下:确诊乳腺癌蜡块切片2um,65摄氏度烤片4小时,二甲苯、无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇各两缸5分钟,自来水冲洗,PBS 2min*3,3%过氧化氢去离子水25摄氏度5分钟,胃蛋白酶消化液37摄氏度8分钟,EDTA高压热修复140摄氏度3分钟(阀门窜气后计时),高压锅放入冷水中冷却,阀门降下后,拿出EDTA塑料盒,放入冷水冷却,一抗4摄氏度过夜(一般16小时左右),二抗37摄氏度30分钟,DAB显色,各步骤之间均PBS 2min*3。
用上述方法做其他抗体均正常,唯独ki-67始终阴性,试过一抗25摄氏度过夜、二抗37摄氏度30分钟也不见阳性。产品为中杉金桥公司,克隆号:K-2 。
请问各位老师问题应该出在哪里。

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哦,我们用的是invsion二步法。

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引用:
原帖由 infi 于 2012-11-13 11:29 发表
步骤如下:确诊乳腺癌蜡块切片2um,65摄氏度烤片4小时,二甲苯、无水乙醇、95%乙醇、75%乙醇各两缸5分钟,自来水冲洗,PBS 2min*3,3%过氧化氢去离子水25摄氏度5分钟,胃蛋白酶消化液37摄氏度8分钟,EDTA高压热修复14 ...
建议你不要用K-2 这个克隆。
推荐你用克隆MIB-1(DAKO) 或 B56 (BD)。

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批号是哪个批次?
人生只有走出来的美丽,没有等出来的辉煌!

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回复 3# 的帖子

谢谢老师,B56这个克隆号的抗体也是中杉金桥的吗,没查到。另外,克隆号7B11的可不可以?
再麻烦您一下,P53和C-erbB-2您用的是哪个克隆号的?

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回复 4# 的帖子

产品批号:11440408

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引用:
原帖由 infi 于 2012-11-14 10:51 发表
谢谢老师,B56这个克隆号的抗体也是中杉金桥的吗,没查到。另外,克隆号7B11的可不可以?
再麻烦您一下,P53和C-erbB-2您用的是哪个克隆号的?
B56这个克隆是BD的克隆,您可以BD中国分公司联系。 克隆7B11,不了解不发表意见。
P53,您可以用克隆 Bp53-12。
c-erbB-2,您可以用 DAKO的多抗A0485。

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谢谢老师了!

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不用客气。

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我用的是迈新的抗体,Ki-67用柠檬酸高压修复,很稳定。
有志者,事竟成,破釜沉舟,百二秦关终属楚。

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