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片子切出来总是散啊,新手求指导

片子切出来总是散啊,新手求指导

我主要做的是骨组织切片,EDTA脱钙2周,片子切出来总这样。本来要求切5mm,根本切不出来,完全散开;7mm这已经算好的了,但是染色出来发现镜下组织还是错位了。各位老师看看是不是因为组织处理哪一步没到位?我的组织处理流程:70%酒精2小时                                80%酒精2小时                                95%酒精1小时X2                                 无水酒精0.5小时X3                                二甲苯1小时X2浸蜡:蜡缸1 30分钟  58度          蜡缸2 过夜(我主要目的是观察中耳上皮及中耳腔渗液的情况,而中耳腔是一个密闭的腔,腊进不去,所以选择过夜,但还是发现腊进不去。。。有什么好办法吗?)
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回复 1# 的帖子

无水酒精时间太短了

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无水乙醇我用了3瓶,总共1个半小时,你们无水乙醇脱多久?

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回复 3# 的帖子

还有是不是浸蜡时间太长了?

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我记得好像你短消息过我,你的无水时间可以加长到1小时*3,二甲苯稍短些,蜡的时间过长不要过夜,组织细胞容易收缩,封闭的组织蜡时间再长也是进不去的,你就试试我前面说的灌注法或是不破坏结构的基础上切开,对于酒精和二甲苯其实也是这样
为人民服务

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好,非常感谢!下批标本收集起来就照老师的方法做!

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不知EDTA脱钙后是否充分水洗??因EDTA配制时需要pH至弱碱性才溶解,因此脱钙完毕应水洗充分。另,楼主说的散开是指切片时散开还是裱片时散开呢?切片时散开可能为组织透明过度,细胞过度收缩,组织发脆,切不成片,易散开;裱片时散开可能因组织中含脂质所致,或裱片水温太高。

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从楼主的图片上来看,切片还是成片了,只是有刀口,组织有点烂

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有划痕,说明刀得换了,组织有点空洞可能是浸蜡不是很好

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