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各位老师,刚开始做切片,发现很多问题但是不知道原因,请老师指点一下

各位老师,刚开始做切片,发现很多问题但是不知道原因,请老师指点一下

1、组织细胞断裂2、组织不在同一平面
3、染色对比不明显
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一步一步,从脱水切片染色,全部按照规范来,是不会有问题的
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因为我是按照我之前的同事留给的操作方法做的和规范是有区别的,有的地方没有条件按照标准操作。
脱水:75%酒精过夜,85%酒精1.5h(9点换第二道酒精),95%酒精1h,95%酒精1h,无水乙醇1h,无水乙醇1h;
透明:三道二甲苯各20分钟(试剂是刚换的)
浸蜡:恒温箱一道石蜡57度过夜(4点到8点30):
包埋:恒温箱温度升到65度,包埋机包埋(温度:62度)
。。。。。
拷片:57度恒温箱过夜
脱蜡:2道二甲苯各15分钟,梯度酒精每道5下
染色:苏木素5分钟(新换的试剂),分化液(新换的试剂)5下,流水兰化30分钟,伊红(试剂未换)1分钟

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感觉和组织处理关系不大,可能是切片技术和染色的问题
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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回复 3# 的帖子

手工脱水?前段时间,我们脱水机坏了也是手工的,处理后的标本和机器的差距还是很大的。另外你的蓝化30分钟也太吓人了吧,不过看你的过程应该问题不大,时间都够了,切片有皱。
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这个案子之后发现蜡块凹陷,我想是脱水和一道石蜡浸蜡二甲苯含量比较高,所以就换了脱水时间和浸蜡的蜡,但是发现还是有问题的。福尔马林固定的组织,流水冲洗1晚
脱水:75%     2h
          85%      2h
          95%      2h
          95%      1h
         100%     1h
         100%     1h
但是,放入二甲苯中30分钟透明还是不明显,所以又返回无水乙醇中有脱水1h,透明效果还是不理想。

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1、固定多少时间?
2、水冲洗1晚太长了,20分钟就可以。
3、脱水:75%     2h
          85%      2h
          95%      2h
          95%      2h
         100%     2h
         100%     2h
        二甲苯   45分钟
    二甲苯   45分钟
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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不好意思,没有说清楚,我不是做活检的,我是做法医病理的,组织都是福尔马林固定1周左右的,因为是手工脱水的,为了方便,所以我一般都是流水冲洗4个小时或一夜的。

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为了方便我们浸蜡就用一道蜡,57度过夜,第二天上班再升温65度包埋,我们用的蜡是58-60的蜡。

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增加脱水时间,减少冲洗时间.
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