glypican

组织块切大约7mmX3mmX3mm大
用4%多聚甲醛4度固定20小时左右(多长时间合适？在室温还是4度固定？）
1XPBS洗
70%乙醇4度脱水过夜
组织块修成5mmX3mmX2mm大后，
95%乙醇 15min；无水乙醇 15min×2。（时间/浓度梯度是否合适？）
1/2乙醇 1/2 二甲苯，15min；二甲苯 2min。
1/2 二甲苯 1/2 石蜡（52-54oC）30min；石蜡 1.5 hr；石蜡 2.5 hr。(时间是否合适？）
切片厚度6um，
同时处理几个组织块，总有些很脆，切不出片子。
切出的片子展片贴片后，37度烘8小时左右。做HE染色时掉片又是怎么回事？
谢谢各位前辈指教！

闲云

脱水不过夜看看！脱水过程中你们还需要休整吗？无水乙醇是2小时还是2分钟？怎么还有步1/2乙醇 ，看不懂！烤片可以62度烤2-3小时，如果不做IHC，65度烤也可以，应该不会掉片了。

glypican

[这个贴子最后由glypican在 2005/05/10 06:22pm 编辑]

   组织块取下来固定后不马上切片的话，我们是在70%乙醇中保存的。（有什么问题吗？）
   脱水时， 无水乙醇是15min，两次
            然后换乙醇和二甲苯的1:1混合物 15min，再换二甲苯透明2min
   另外：我们用的蜡熔点是52-54度左右的，62度烤片不就化了吗？用普通的烘箱可以烤片吗？
   大家帮忙看看整个过程有什么要改进的？
   

闲云

然后换乙醇和二甲苯的1:1混合物 15min，你们还有这一步，我没这样弄过！烤片可以比蜡的温度高一些，组织不会化的。别弄的那么复杂。

zmhsky

小鼠肝组织石蜡切片脱水时间70%乙醇80%乙醇95%乙醇各2小时   无水乙醇 1小时×2    二甲苯，30min；二甲苯 15min    石蜡（52-54oC）30min；石蜡 1.5 hr；石蜡 2.5 hr

SNA

自己的经验，脱水效果很好：

小鼠肝脏组织脱水时间：

65％乙醇      1.5h

75%乙醇             1.5h

85%乙醇            30 min

95%乙醇Ⅰ    15min

95％乙醇Ⅱ    20 min

无水乙醇Ⅰ    5 min

无水乙醇Ⅱ    8 min

二甲苯Ⅰ      5 min

二甲苯Ⅱ      5min

蜡Ⅰ          3min

蜡Ⅱ          3min

蜡Ⅲ          3min

ding76340646

把做好的蜡块放在装有生理盐水的肾形盘里  放在冷苔上 冰下    看怎么样

刘振伟

切片时可以调整切片厚度，对于肝脏薄些比厚些要好切，可以试试

jiaguotao

引用:

原帖由 SNA 于 2009-6-17 09:22 发表
自己的经验，脱水效果很好： 小鼠肝脏组织脱水时间： 65％乙醇      1.5h75%乙醇             1.5h85%乙醇            30 min95%乙醇Ⅰ    15min95％乙醇Ⅱ    20 min无水乙醇Ⅰ    5 min无水乙醇Ⅱ    8 min二甲苯Ⅰ ...

比较实用

KETTY

这么小的组织常规处理就可以，肝脏组织取材可以稍微厚一点。