快速石蜡切片在免疫组化染色中的应用
林明珠,张闽峰,郭以河,戴太监 (解放军第175 医院病理科, 福建漳州 363000
快速石蜡制片是病理检验的常规技术之一,而制作出良
好的组织切片是免疫组化染色的基础和前提。本室将常规
快速石蜡切片直接用于免疫组化染色,获得较好的结果。
1 材料与方法
111 材料 收集解放军第175 医院送检组织标本进行超声
波快速处理,并将石蜡切片直接进行p63、c2erbB22、ER、PR 等
单克隆抗体标记。免疫组化染色采用MaxVision 一步法,试
剂盒为福州迈新生物技术开发有限公司产品。
112 方法 先将超声波快速处理仪开机预热至70 ℃,取较
薄的组织放入内有4 %中性甲醛液的小烧杯中进行4 min超
声处理;用手术刀将组织修成1 mm厚的薄片,再放回固定液
内2 min ;取出组织放在滤纸上吸干,放入纯丙酮中超声处理
4～6 min ,直至组织上浮、变白、较硬韧;再放入预熔好的石蜡
中(70 ℃) 超声处理5 min ,待气泡减少,组织下沉;用加热的镊
子将组织嵌入事先准备好的空蜡块中,用载玻片压平组织,
放在冰上冷却,常规石蜡切片厚度3～5μm。
将快速石蜡组织切片脱蜡至水化后,与常规石蜡切片一
样进行免疫组化标记,用新鲜配制的DAB 液显色,阳性显色
为棕色。2 结果
快速石蜡切片进行免疫组化染色后,光镜下组织结构完
整、清晰、无裂痕,细胞质与细胞核阳性对比清晰鲜艳,细胞
核、细胞膜阳性着色定位准确,背景干净、清晰,无非特异性
着色,敏感性高,特异性强(图1) 。在免疫组化染色过程中,
乳腺癌组织无掉片现象,阳性与阴性对比鲜明(图2) 。
3 讨论
常规制片工作中,组织处理时间过长或温度过高容易造
成抗原流失,而快速石蜡制片过程仅用30 min左右,对抗原保
存较好。快速石蜡切片不仅操作简单方便、安全、易于掌握,
而且对微小病灶组织及术中活检组织进行免疫组化鉴别诊
断提供了宝贵的组织来源。及时、恰当、完好的固定是制作
好的组织切片的基础,也是免疫组化染色的最基本前提。操
作过程中应注意: ①取材时避开出血、坏死区; ②超声技术作
用于组织的原理是利用超声波使组织和有机溶剂或预溶石
蜡高速振荡,产生周期性缩张运动,使组织中的水分更容易
被有机溶剂替代,起到快速固定、脱水、浸蜡的效果,由于此
过程较短,所以把组织修为薄片尤其重要; ③免疫组化染色
步骤要严格按照操作规程进行,充分的PBS 缓冲液冲洗及根
据每一种抗体的要求,对组织抗原进行相应的修复,有利于
减少背景着色和非特异性着色。本室发现,用快速石蜡切片
进行免疫组化染色时,高压锅进行抗原修复可将煮沸喷气时
间缩短为1 min ,不但效果好,而且缩短了切片煮沸的时间,切
片更不易脱落。试验对照发现,未经抗原修复的组织切片仍
然可以强阳性着色,如c2erbB22、CD34、LCA、S2100 等抗体,由
此可见快速石蜡组织切片抗原保存得更好、更容易暴露。将
即用型快捷免疫组化应用在快速石蜡切片中可大大缩短制
片时间,取材当天即可出诊断结果,提高了工作效率。
[
本帖最后由 九日 于 2011-2-18 09:51 编辑 ]
