joanna

HI，各位高手：
我做原位杂交的过程中碰到些问题，恳请指点：
1、我用4%多聚甲醛固定早孕期绒毛，之后浸于蔗糖中，待下沉后冰冻切片。请问固定需多长时间合适？（我的组织疏松，如一团银耳状）
2、我买的DAB浓缩液，配成的工作液呈淡淡的黄色，滴在组织上，在镜下看到的组织就为黄色，很难判断何时该终止反应，这问题该如何克服？另外，DAB最长可反应多长时间？H2O2的浓度为0.01%好还是0.015%?
3、冰冻切片在37度烤片,多长时间合适?过长是否不利于后面的杂交步骤?
:em02:  :em02:

dingwei

我们只做石蜡的原位杂交，冰冻的没经验

肥肥佬

引用:

下面引用由joanna在 2002/11/09 03:02pm 发表的内容：
HI，各位高手：
我做原位杂交的过程中碰到些问题，恳请指点：
1、我用4%多聚甲醛固定早孕期绒毛，之后浸于蔗糖中，待下沉后冰冻切片。请问固定需多长时间合适？（我的组织疏松，如一团银耳状）
2、我买的DAB浓缩 ...

是做半导体制冷的切片吗？否则固定后的组织冰冻切片不宜。DAB和H2O2的使用各实验室的质控标准是不一样的，不好一概而论。冰冻切片好像不用烤片吧。

ketty

没做过杂交，很尴尬！ :em15:  :em15:  :em20:  :em20:  :em17:

可乐猫

引用:

下面引用由肥肥佬在 2002/11/10 09:15pm 发表的内容：
是做半导体制冷的切片吗？否则固定后的组织冰冻切片不宜。DAB和H2O2的使用各实验室的质控标准是不一样的，不好一概而论。冰冻切片好像不用烤片吧。

现在哪里还有用半导体制冷做冰冻切片的？早就淘汰啦！