lijianwen806

各位老师：
您们好，我有几个问题想请教下，我的实验是将荧光颜料标记的细胞植入到动物体内，一个月后取材冰冻切片做细胞示踪和组织S-100的免疫荧

光检测的。目前结果显示原荧光染料标记的细胞还在，但切片行S-100的免疫荧光后发现红色的荧光染料全部褪色了，因为我这种染料是溶于有

机溶剂的，估计是在用0.2%TintonX-100通透时溶解掉了。想请教几个问题：
1、我切片前组织的准备：按荧光染料的说明书建议，取材后立即放-80度冰箱，过夜后取出行冰冻切片，切片室温干燥1-2小时后，放-20度保

存，用时再取出。我感觉这方法还可以，不会掉片，也能看到标记的细胞。所以切片前我的组织是不固定也不脱水，但这样子对做组织的免疫

荧光的效果有影响吗？会不会影响一抗与组织抗原的反应了吗？
2、我切片的厚度是10-20um都有，我看很多人切4-5um的，这切片厚度对组织免疫荧光的效果有影响吗？
3、我为了避免组织在过0.2%TintonX-100通透时褪掉，于是我就省掉了这一步，果然标记的染料就没褪色，但不通透会影响一抗与组织抗原的

反应吗？
4、还有我免疫荧光步骤中：山羊血清封闭，4度，3小时；  一抗，4度，24小时；   二抗，4度，4小时。大家觉得可以吗？