九日

1 　材料与方法
取材最好为新鲜材料,并修成015cm ×015cm ×015cm的小块。固定采用10 %的福尔马林浸泡至少48h 或4 %的多聚甲醛浸泡固定至少6h。乙醇脱水:固定后的组织块入纹,并且组织的脱水透明程度和染色效果均良好。
3 　注意事项及优缺点分析
由于正丁醇的脱水透明作用较乙醇和二甲苯缓和,故对于肝、脾等结缔组织较少的组织较为适用。应用正丁醇可有
效避免组织裂纹,不仅对肝组织及细胞的观察有利,而且对组织切片成像的效果和进一步的图像分析处理有益。本方法的实验条件要求不高,操作步骤简单易学,在石蒸馏水冲洗2 次,每次不少于30 min ;再依次入50 %、70 %和80 %的乙醇脱水,每级不少于6h。正丁醇脱水、透明:组织块入90 %的正丁醇2～3h ,然后分别经95 %和100 %的正丁醇2 次各2h。石蜡包埋切片;组织块浸蜡2 小时后石蜡包埋,行组织切片,经HE 或天狼腥红等常规染色后观察。
　结果
光镜下,采用乙醇二甲苯脱水透明的肝组织的石蜡切片中,交织在正常的间隙- 肝窦之间,常常可见长短和宽窄不一的较细碎裂纹或较长的裂隙,尤其在中央静脉、胆小管和组织块的边缘处更为明显。而采用不同浓度的正丁醇脱水透明的肝组织标本的石蜡切片上, 基本上看不到上述的裂蜡包埋过程中仅应用了正丁醇一种试剂;同时,实验效果显
著,尤其对经验较少的技术人员更为适用。因此,在肝、脾组织的石蜡制片中,正丁醇是理想的乙醇和二甲苯的替代物。
但正丁醇对组织的脱水透明时间较长。
本技术方法有两个方面最值得注意:其一是正丁醇带有较强的刺鼻气味,故实验应在通风好的地方或在通风橱内进
行;其二是正丁醇的脱水透明作用较缓和,要求实验者应根据肝组织块的大小,适当调整其作用的时间。
此文转载于《解剖科学进展》　2004 ,10 (2) :190
作者：田　珑,张卫光

llj19971997

谢谢。最近在做大鼠的肝脏石蜡切片。总是组织很硬，碎。二甲苯是看着透的。结果也不好。考虑是浸腊时间长。第一次，石蜡一个缸2小时，共两个缸，纯酒精，两个各45min。效果不好。第二次，石蜡一个缸30min,共2个，纯酒精，两个各25min，95%，每个30min，共两个。效果还是不好。正想如何解决呢。下次我打算按论坛中给出的时间再试试，因为论坛中给的是小鼠的，而且低浓度酒精没有过夜，得白天做，所以就没有采纳。现在我决定做两个对比一下.
一个时间如下：
70% 1.5h   80%  1.5h  90% 30min 95% 15min 95% 20min  100%  5min  100%  8min 二甲苯 20min（我个人观察3Mm厚的肝脏大约需要这个时间）。石蜡 15min 石蜡 15min。

另个一使用您所提供的方法。（呵呵，不过我得去翻翻有没有正丁醇）

谢谢老师提供一种新的方法。