石蜡切片HE染色着色不良的原因及矫正方法（转载节选）
1 切片部分区域失染
常见原因是切片脱蜡脱苯不彻底,组织切片部分区域被其覆盖,水溶性的染液被石蜡或二甲苯形成的薄膜阻隔,不能与切片充分接触而失染。彻底
脱腊、脱苯即可纠正。
2 染色不良
HE染色时偶能看到着色不良的切片,颜色呈灰蓝色,暗淡不清晰、核浆泛染。这是由于切片分化时间过长或分化液酸度过高。处理:降低酸度,镜下控制,分化后立即水洗。苏木素氧化不全。处理:应重新配置。个别切片染色不佳,甲醛固定时间过长,或稀酸脱钙后。处理: 弱碱处理,流水冲洗,必要时可选用铁苏木素或天青兰- Harris苏木素(或天青兰- Mayer苏木素)补救。组织所用固定剂不当。可将切片下行至水,改用适当固定剂媒浸后重染。切片脱蜡不净,着色不均,更换脱蜡试
剂,延长脱蜡时间。在冬季,特别是室温在20℃以下时,染色前首先将切片放置温箱中预热,使切片上石蜡熔化,再投入二甲苯中脱蜡,或将二甲苯稍加温后再脱蜡[ 1 ] 。切片脱水不彻底,更换染色后脱水用乙醇,二甲苯。切片局部染色不鲜艳、云雾状,特别是淋巴组织:常因组织脱水不好所致,可用硫酸铁铵来适当改善补救。
3 切片过染
苏木素过染时细胞核呈黑蓝色球形,染色质结构不清楚,严重影响甚至不能诊断,这是因为苏木素过染且分化不足造成的,注意控制分化程度就可以解决。伊红过染时使原本是蓝色的细胞核又被伊红覆盖变成紫红色,胞浆红色加深,整张切片一片彤红,结构不清。纠正时严格控制伊红染色时间,充分分化。
4 切片淡染
淡染的切片中细胞核结构朦胧不清,病变不易观察,通常见于固定液的质量问题:常用的单纯固定液福尔马林( formadehyde) ,其自身也是一种还原剂,极易挥发,有强烈的刺激性气味。经福尔马林固定的组织细胞核染色较好。但胞浆着色差些。处理:经福尔马林固定时间较长的组织需经24h～48h流水冲洗,另外,可在备用的甲醛溶液中放入适量的碳酸镁或碳酸钙;或采用简便方法,在溶液中放人适量大理石或白色粉笔作为中和剂。除此之外,酸性福尔马林固定的组织多易产生一种褐色
色素,即福尔马林色素,这种色素既不溶于水又不溶于酒精,且影响染色效果。可采用Schriddc氏法或Verocay氏法将色素除掉。染料纯度:不同厂家或同一厂家不同批号的染料产品,其纯度往往不一,为求得满意的效果,要按纯度调整染液中苏木精、伊红的含量。先求出校正率:校正率=原来染料纯度÷现在染料纯度。现在所需染料的量=原来染料所需的量×校正率。在配染液前将伊红、苏木素放人研钵中研磨。因切片机反复使用,存在一些客观误差,人为操作造成主观误差,使切片不均
匀,因此染色也不均匀,切片厚的部位染色深,切片薄的部位染色浅。在切片之前,应把刀磨快,通常使用磨刀机磨刀。一般磨一把刀应始终使用同一
磨刀机,效果才最好,否则因受力改变,影响刀口或短寿命。磨好的刀应无缺痕,刀刃两侧倾角对称,切片时用力要均匀,力争将误差减到最小。
5 细胞核和细胞浆染色对比不明显可能原因:甲醛液中固定时间过长;切片过厚;组织固定不佳;苏木精和伊红染色分化不良。处理:固定液甲醛易氧化成甲酸,使细胞核在酸性液体的作用下不易着色,而细胞浆酸性增加后伊红染色加深,所以在备用的甲醛溶液中加入少量的碳酸镁或碳酸钠来做中和剂,以防止染色不良[ 2 ] ;切片
厚度控制在3～5μm;组织充分固定;苏木精盐酸酒精的分化要适当,使细胞浆多余的颜色分化掉;伊红染色后的脱水要充分,低浓度酒精脱水时间过
短,使细胞核有伊红染料沉着,多数出现核着色不佳,伊红着色过深。
6 切片褪色
切片分化蓝化时残留酸碱溶液需充分洗净。切片染色后脱水透明需彻底。
7 切片上出现黑色小点或黑色亮边的白圆圈是因为切片脱水不彻底,切片上仍留有极少量
水份的缘故,应定期更换无水酒精或重新脱水。另外切片上还可见一种水藻样黑蓝色结晶,为苏木素的过氧化物膜贴浮于切片上所致。因此,染色前要
注意去除过氧化物膜[ 3 ] 。综上所述,要想做出一张高质量的组织切片,作为一名技术人员,首先掌握石蜡切片HE染色的机制及操作过程,其次要有高度的责任感. 一张切片的好坏,直接影响到教学效果、科研的最终成果及对病人的诊治. 石蜡切片HE染色虽然操作过程繁琐复杂,只要做到一丝不苟,精益求精,就能避免
以上问题的出现,作出优质的石蜡切片。
此文转载于《内蒙古医学院学报》 2006年12月 第28卷
作者：李 成, 贾维民, 张希国
