冷冻切片易见的问题及处理（转载节选）
一、切片不全或不能切片 (1) 组织内含有过多的脂肪或坏死区域过多。此时, 应保持组织的新鲜, 冷冻及时, 应把多余的脂肪切掉, 尽量避开坏死太多的区域。冷冻的温度可适当调低2 ℃～3 ℃。冷冻的时间也适当延长, 切片可切5～6 微米厚。(2) 切片时组织出现粉末及破裂。出现这一问题多是由于冷冻的温度太低, 或标本冷冻时间过长。尤其是对于甲状腺、淋巴结、脑组织等质地细嫩及含水过多的组织应特别注意, 根据组织块的大小, 性质确定适合的冷冻时间。
二、组织块脱落 (1) 冷冻头上的包埋剂未干净或冷冻头冷冻时间过长, 包埋剂还未完全浸透冷冻头的底部就凝固了。(2) 组织块过大, 一般取材大小应在1cm×1cm ×013cm , 但一些质地较细,取材不易的情况下可稍大些。带有包膜的乳头样组织, 取材时应适当增加厚度, 修块时尽量修到与包膜乳头平行, 这样有利镜下的观察, 同时也保证了切片的完整。(3) 在冷冻头尚未达到所需的温度时, 不要放置标本, 否则包埋剂四处流溢, 一旦包埋剂冷冻后影响冷冻头放入夹头内, 若时间较紧急, 立等用时, 可喷速冻剂(液氮) , 但组织易回软, 不易切片, 此时操作者的动作应迅速。(4) 当组织新鲜, 取材块又较大、较厚时可将组织块直接放在冷冻头上(不需加包埋剂) , 直接将冷冻头放在速冻台上, 这样可以在短时间内达到所需硬度。既节约冷冻的时间, 又不影响组织的观察。(5) 微小黏膜或肾穿、肝穿等组织, 一定要放包埋剂。这时的包埋剂起支撑、保护及垫高标本的作用。在放小组织前, 要先等冷冻头降至一定的温度, 滴上包埋剂, 当包埋剂冷到一半时, 快速将小组织平放在包埋剂中央, 再滴少许包埋剂, 待完全冷却后切片, 这样不会在修块时将小组织一刀切完, 也不易出现粉末。(6) 组织过冷时, 可在组织上吹口气,使组织稍回软, 也是避免粉末出现的办法。
三、切片的皱缩 任何配有防卷板和不配防卷板的冷冻切片机, 在切片前都应检查刀的锋利情况、刀片及防卷板有无异物, 刀片及防卷板的角度。在切片机内应随时配有毛笔、镊子及替换的刀片, 否则临用时才将室温下的物品拿到冷冻机内用, 会因温度不同影响切片或延误切片时间。贴片时应先由下往上贴, 同时应用巧力轻轻往下拉, 这样能使切片减少一些皱折。摇动切片机时, 用力应均衡, 否则切片会出现厚薄不均, 切片刀若后放入冷冻机内与组织块的温度不一也易出现皱缩。
四、切片脱落 冷冻切片是利用玻片与组织切片的温差将组织切片粘附在玻片上然后进行固定、染色等一系列工作。当组织坏死、脂肪过多、切片过厚、玻片不干净等, 均易出现切片脱落。
五、“冰晶”现象 组织在冷冻过程中, 时间过长易出现“冰晶”, 特别是脑组织及淋巴组织。这时, 制片者应在温度达到组织所需硬度时切片、贴片, 然后在酒精灯上晃动两下立即放入常规固定液或95 %的酒精固定1～2min , 这样可减少一定的“冰晶”现象。在科研或不需要术中快速诊断的情况下, 可先将组织用10 %的福尔马林固定, 然后在20 %的蔗糖中脱水一夜再冷冻切片, 这样“冰晶”现象会得到有效控制。
六、染色 切片经固定后立即放入苏木精染液中1～2min , 流水冲洗(若苏木精内加入少许冰醋酸, 切片可不必分化) 数分钟后观察核的着色程度, 入伊红染液, 行胞浆染色、脱水、透明、封固。
七、做好日常维护工作 每次切片后, 应关好冷冻窗, 以保持冻箱内的温度, 切片完后应清扫干净冻箱内的杂物, 避免污染。传染性标本, 如结核, 切片后应及时消毒。定期擦拭冷冻机, 冷冻机在不用时应关好电源打开盖子使之干燥, 然后在各个关节接口处加入防冻油。总之, 要作出一张完整、优质的冷冻切片, 除取材的因素外, 要求技术员必须加强责任心, 在日常工作中不断的摸索、总结、改进, 才能提高切片质量。
·此文转载于《云南医药》·2005 年第26 卷第2 期
作者：危 群, 袁志伟, 胡 琰
