九日

免疫组化在病理诊断中广泛而深入的推广和应用，使之在辅助诊断、鉴别诊断方面进入了一个传统病理学极少涉及的领域，使病理诊断提高到了新的水平。最近几年发展的PV 法又称为两步法使得免疫组化染色技术更加简单快速，背景更加清晰。本院病理科细胞涂片均采用中性福尔马林液固定，本文对细胞学检查疑似阳性的涂片，将HE 切片褪色处理后行免疫组化染色的体会介绍如下。
1 材料与方法
1． 1 标本细胞学检查疑似HE 染色的细胞涂片( 本文涂片为腺癌细胞阳性片为例) 。
1． 2 主要试剂和仪器10% 中性缓冲福尔马林，TEG 缓冲液( 0. 121% Trisbase，0. 019% EGTA，pH 9. 0) ，0. 01 mol /L， PBS( pH 7. 2 ～ 7. 4) ，EliVision 免疫组化试剂盒，PBS 磷酸盐，缓冲液，CK( AE1 /AE3) 鼠单克隆抗体，0. 3% H2O2-甲醇液( 以上试剂购自福州迈新公司) ，洗液( 0. 01 mol /L PBS，0. 1% BSA， 0. 2%明胶，0. 05% 皂甙，pH 7. 4) 。美的电磁炉( 120 ～ 2 000 W) ，5L 高压锅( HPC-1001) 。
1． 3 实验步骤先将HE 涂片用二甲苯脱胶，递次乙醇水化，经1%盐酸乙醇褪色至无色，使用配好的洗液浸泡或冲洗5 min 接免疫组化染色。TEG 热修复后待玻片冷却，用0. 3% H2O2 － 甲醇液30 min 消除内源性过氧化物酶活性，然后用洗液冲洗3 × 3 min，滴加一抗CK( AE1 /AE3) ，4℃冰箱过夜。次日，玻片用洗液冲洗3 × 3 min。滴加二抗( 两步法试盒) 温箱30 min 后，用洗液冲洗3 × 3 min。DAB 显色，镜下控制显色时间，适时终止，苏木精复染，递次乙醇脱水，二甲苯透明后树胶封固。
2 结果
阅片由有经验的病理医师完成。镜下可见腺癌细胞呈棕黄色小团，玻片上无背景，其余部分为淡蓝色 。
3 体会
本文方法与常规石蜡切片免疫组化染色方法不同在于:
( 1) 抗原修复过程中使用高pH 值的TGA 修复液［1］，效果要好于低pH 值的枸橼酸盐液; ( 2) 一抗CK( AE1 /AE3) 孵育4℃冰箱过夜，效果较好，而且背景也较低［2］。( 3) 应用含
BSA、明胶和皂素的洗液代替PBS，在洗片时可进一步封闭组织蛋白与抗体非特异性结合，从而获得更好的染色效果及更佳清晰的背景［3］。( 4) 将普通的细胞痰涂片行HE 染色褪
色处理后进行免疫组化染色分析［4］。( 5) 应用0. 3% H2O2－ 甲醇液消除内源性过氧化物酶，比单纯应用3% H2O2效果好［5］。
此法可用于怀疑有癌细胞的痰涂片及胸腹水涂片，可起到辅助临床病理诊断定性作用。因此，该方法很值得在组织学与病理学、免疫组化研究与临床诊断上推广应用。
参考文献:
［1］ 缪德贵，黄世章． 不同的抗原修复方法对免疫组化染色结果的影响［J］． 临床医学工程，2009，16( 3) : 62 － 3，5．
［2］ 黄秀娟，张喜，邓昊． 免疫组化PV 二步法与三步法比较［J］． 数理医药学杂志，2
009，22( 1) : 27 － 8．
［3］ 赵杰，魏志敏． 免疫组化技术的标准化质控管理［J］． 青岛
大学医学院学报，2009，45( 2) : 175 － 6．
［4］ 牛正龙，刘静． 膜式液基薄层细胞学技术制片的体会［J］．诊断病理学杂志，2
011，18( 2) : 69．
［5］ 马云胜，宁斌，翟效月，任昊． 降低肾脏免疫组化染色背景着色的方法［J］． 临床与实验病理学杂志，2011，27( 1) : 104－ 5．

此文转载于《临床与实验病理学杂志》2011 Nov; 27( 11)
作者：方杰1，盛晓光2，吴嘉端2
作者单位：1 北京中医药大学东直门医院病理科100700
                 2 北京中医药大学临床中药系100102