改良三色法显示石蜡切片中的神经轴突及神经髓鞘
显示神经轴突或神经髓鞘的染色方法已有多种
[ 1]。我们将 Meyer 等[ 2]的改良三色法加以改进, 可在石蜡切片中
同时显示神经轴突及神经髓鞘, 经过反复实验, 取得了良好的染色效果。
一、材料与方法
1 实验标本: ( 1) 人体检材: 正常人体脑干组织及脊神经根; (2) 动物标本:
正常 Wistar 大白鼠脑干组织及股神经。所有标本均经 10% 福马林固定 20 小
时, 常规石蜡包埋, 切片厚 5 m。2 试剂配制: ( 1) Harr is 苏木素: 将0 5 g 苏木素精加入 5 ml 无水乙醇中溶
解, 将 10 g 硫酸铝钾加入 100 ml双蒸水中溶解, 将两种溶液混匀后加热至沸, 即
加入 0 25 g 黄色氧化汞, 待溶解后在冰水中冷却, 过滤后加入 5 ml冰醋酸。该
染液可在室温保存 1 个月左右, 若保存时间过长应适当延长染色时间。(2) 三色液
[ 2]: 将 0. 3 g 固绿 FCF, 0 6 g 变色素 2R 及 0 6 g 磷钨酸依次加入 100 ml
双蒸水中溶解, 再加入 1 ml 冰醋酸, 调节 pH 值至 3 4。该染液可在室温保存
两周, 若保存时间过长或 pH 值发生改变, 则染色偏紫, 绿色变浅。(3) 0 3% 冰
醋酸溶液, 在临用前配制。
3 染色方法: ( 1) 切片常规脱蜡至水; (2)Harris 苏木素液染 5 分钟; ( 3)双
蒸水冲洗 5 分钟; ( 4) 三色液染 30 分钟;( 5) 0 3% 冰醋酸冲洗 2 次, 每次 5 秒钟;
( 6) 流水冲洗 5~ 10 分钟, 至切片组织不脱色为止; (7) 脱水、透明、中性树胶封片。
二、结果
神经轴突呈绿色或蓝绿色, 神经髓
鞘呈枣红色或紫红色; 神经元的细胞浆
呈蓝绿色, 细胞核呈紫蓝色, 核仁呈鲜红
色; 红细胞呈鲜红色, 血管的内弹力膜呈
绿色, 胶原纤维呈绿色( 图 1, 2) 。
三、讨论
1 M ey er 等[ 2]的改良三色法可在冰冻切片中同时显示神经轴突及神经髓
鞘。我们发现, 若将此方法用于石蜡切片, 需在以下几个方面加以改进: ( 1) 延
长在三色液的染色时间, 可增强神经轴突及神经髓鞘的染色, 若按原方法( 在三
色液中染 10 分钟) 进行, 神经轴突及神经髓鞘的染色很浅, 对比性差。( 2) 降低
冰醋酸的浓度, 并缩短反应时间( 原方法是在 0 6% 的冰醋酸中洗 2 分钟), 使得
在分色时更容易掌握。( 3) 冰醋酸冲洗后即入流水中冲洗至切片组织不脱色为
止, 否则, 除神经髓鞘外的其它组织成分也会呈红色, 掩盖神经轴突及细胞核的
颜色。此外, 用梯度酒精脱水时, 最好从95% 酒精开始, 数秒钟后即入无水酒精,
在 95% 酒精中的时间过长会使神经轴突的绿色变浅。
2 改良三色法除可以同时显示神经轴突及神经髓鞘外, 还可以显示常见
的病理改变, 如纤维化、髓鞘脱失( 轴突变性)、炎症细胞[ 2]以及出血等。我们将
此方法加以改进后, 可用于经石蜡包埋的神经组织, 与原方法相比, 神经轴突及
神经髓鞘的染色更为清晰, 颜色对比鲜明, 为神经组织的病理学研究提供了一
种新方法。
参 考 文 献
1 凌启波 实用病理特殊染色和组化技术
广州: 广东高等教育出版社, 1989 152
165
2 M eyer R, Claussen GC. Oh SJ. M odified
trichrome staining t echnique of t he never t o
det ermine proximal never viability. M icro
surgery, 1995, 16: 129 132.
文章转载于《中华病理学杂志》1998 年 6 月第 27 卷第 3 期
作者：邓平 宋一璇 祝家镇
作者单位：广州, 中山医科大学法医学系法医病理学教研室
