请各位老师帮忙，本人现要做神经标本的hoechst核染色，
步骤如下：1、4%的多聚甲醛固定24h；
2、20%的蔗糖浸泡24h；
3、30%的蔗糖浸泡24h；
4、10微米冰冻切片机切片；
5、0.01 M PBS 3次/5min；
6、hoechst 1:100稀释避光染色30min;
7、0.01 M PBS 3次/5min；
8、荧光显微镜下观察。
现在遇到的问题是经多次实验染色，荧光显微镜下都没有看到有染上色的荧光，不知道上述步骤 是否有错误；请教各位老师染不上色还有哪些原因，现在实验做了好多次都没有成功，心里着急啊，多谢各位高手指点！
