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可能是阻断液的浓度低或阻断时间不够、一抗体孵育时间过长（看一下抗体的说明书，是30分钟还是60分钟）、DAB显色剂的浓度过高，特别是加强型的，反应时间太快，非常容易带出背景，如果还是没有解决，PBS多冲冲。
现在用自动染色仪，辅料就像不要钱的，至少是手工的5倍用量。