不同固定方法对肝糖原显示的影响(转载节选)
1 材料与方法
111 材料 选用昆明种小鼠( 25 g左右) 10 只; 7种不同固定液: Gendre液、Rossman液、Carnoy液、无水乙醇80%乙醇、生理盐水甲醛液、AAF液; 1%过碘酸溶液, Schiff氏染液, Harris苏木精染液。
112 方法 小鼠早晨喂食后2 h颈椎脱臼处死,迅速取出肝,均分成7小块,分别浸入7种固定液并置于4℃冰箱,按常规时间固定,常规脱水、透明、浸蜡、包埋、4μm厚连续切片、烤片。PAS染色(1%过碘酸氧化5 min,水洗5 min、蒸馏水洗后入Schiff试剂20 min) ,同时以淀粉酶消化切片作阴性对照,不经过碘酸氧化作阳性对照。水洗10 min, Harris苏
木精30 s复染胞核,水洗蓝化,常规脱水,透明,封片。用Nikon2YS100显微镜观察切片。
2 结果
糖原颗粒呈紫红色,在切片上以点状或玫瑰花状堆积出现于肝细胞胞质内,胞核淡蓝色。不同固定方法获取的切片, PAS反应强弱差异较大。以无水乙醇、80%乙醇、AAF液固定的切片PAS反应强,胞质内紫红色糖原颗粒含量丰富,染色深,无水乙醇固定肝糖原显示切片周边好于中心部位,但肝细胞有收缩现象。Gendre液、Rossman液、Carnoy液固定
的切片染色较弱,生理盐水甲醛固定切片染色最浅,有些细胞内糖原颗粒甚至缺如。阴性和阳性对照切
片均未见紫红色阳性糖原颗粒。
此文转载于《杭州师范学院学报(自然科学版)》2005年11月
作者:尹洪萍,袁 红
作者单位:杭州师范学院基础医学部,浙江杭州310036