九日

摘要: 目的，本研究通过比较3种抗原修复的方法在免疫组化中的应用效果, 以探求提高不同抗体表达方法的
最佳修复方法。方法，分别采用高压修复法、微波修复法、酶消化, 用Env ision试剂盒进行化学反应, 检测比较
ER、PR、CerbB- 2、A ctin、CD68、CD20、CD45RO、P53、CK 染色的结果。结果，3 种抗原修复方法有较大差异, 高
压修复法最佳, 微波修复法其次, 酶消化最不稳定。结论，采用高压修复法, 能使阳性率提高, 且方法简单、经
济, 易于推广使用。
关键词: 免疫组化染色; 抗原修复
免疫组织化学技术其基本原理是用已知抗体
去检测未知抗原, 而抗原在组织固定过程中因蛋
白质的氨基与醛基交连成羧甲基, 使部分蛋白抗
原决定簇被封闭, 必须打开其封闭, 使之充分暴
露, 才能与抗体完全结合, 故在免疫组织化学技术
中抗原的暴露修复是至关重要的。如修复不充
分, 容易出现假阴性[ 1- 2] 。故每个医院都有自己使
用抗原修复的方法, 但大致原则是一致的。现将
福建省肿瘤医院3种不同修复方法对免疫组化结
果的影响分析总结如下:
1，材料及方法
1. 1 ，仪器设备， C alanzWP750 微波炉, 功率
750W, 市售苏泊尔家用高压锅20CM1 个, 试管1
个, 金属、塑料切片架各1个。
1. 2，试剂 ，抗体为福建迈新试剂公司生产, 加热
缓冲液为01M柠檬酸- 柠檬酸盐( pH6，0)、PBS
缓冲液( pH7.4 ), 胰酶浓缩剂和稀释剂, 100U I的
混匀酶试剂。
1. 3,病理来源,取自福建省肿瘤医院2000 年以
后肿瘤手术切除标本病例, 所有组织都经10% 中
性甲醛固定、石蜡包埋、常规2~ 3m 连续切片。
1. 4,实验方法,载玻片用酸洗液浸泡, 充分洗
涤、烘干, APES(丙酮1:50 )处理以防脱片。常规
组织切片至二甲本脱蜡入水。梯度乙醇水洗后,
用蒸馏水冲洗3 遍。高压修复法: 将0.01M 柠
檬酸- 柠檬酸盐( pH 6.0) 1000ML的修复液直接倒
入压力锅中, 加热至锅中液体冒泡, 放入切片, 盖
严锅盖, 再加热至喷汽, 即达到工作压力及温度,
计时1分45秒, 压力锅离开热源, 自来水冷却, 打
开锅盖取出切片, 自然冷至室温, 用PBS ( PH7.4)
缓冲液冲洗。微波修复法: 将0.01M 柠檬酸-
柠檬酸盐( pH6.0)修复液倒入微波炉中, 加热至煮
沸, 将脱蜡水洗后的组织切片置于耐高温的塑料
切片架中, 放入已沸腾的缓冲液中, 中档继续处理
15m in, 取出微波盒, 室温放置20m in 取出, 水洗。
酶消化法: 组织切片经0.1% 复合消化液室温消
化, 根据组织新鲜程度确定消化时间: 新鲜组织
5m in, 固定半年内组织10m in, 陈旧组织(固定半年
以上) 20m in。各组再分别用Envision试剂盒进行
化学反应, 冰箱4°过夜。其余均一样按说明书进
行, DAB 镜下控制显色, 苏木素复染、分化、蓝化、
脱水、透明, 中性树胶封片。
2.结果
通过对9种抗体的检测结果显示, 3种不同的
修复方法对其结果有差异, 详见表1。
表1, 9种抗体3种修复方法染色表达结果
抗体肿瘤组织高压修复法微波炉修复法酶消化法
ER 乳腺+ + + -
PR 乳腺+ + + +
C erbB- 2 乳腺+ + + + +
Actin 平滑肌瘤+ + + + +
CD68 淋巴瘤+ + - -
CD20 B 淋巴瘤+ + + + +
CD45RO T淋巴瘤+ + + + + +
P53 胃癌+ + + + 弱+
CK 肠癌+ + - +
从上表中可看出高压修复法的染色结果均在
+ + 以上, 微波修复法的染色结果+ ~ + + , 而酶
修复法的染色结果在- ~ + + 不等。因此3 种抗
原修复方法还是有比较大的差异, 高压修复法效
果最佳, 阳性定位好, 稳定; 微波修复法其次, 阳性
定位好, 但不够稳定; 酶消化法最不稳定, 不易控
制。
3,讨论
合理选择抗原修复方法是一个在实际操作过
程中反复摸索而不断完善的过程, 其主要目的是
提高难以检测到的细胞内和细胞核的抗原检测率
和染色强度, 为病理诊断提供准确性和稳定性的
参考依据。由此可见热修复抗原被广泛接受, 其
原理是使抗原性物质分子运动加剧, 最终打破封
闭的抗原决定簇的化学键和蛋白质分子之间的交
联, 使抗原暴露, 达到抗原修复的目的。酶消化则
是溶解覆盖于抗原表面的变性蛋白使之暴露并增
加细胞通透, 由于切片上组织的种类不相同, 造成
酶消化的时间不易控制, 酶消化时间的过长会造
成抗原的过度消化, 过短则会造成抗原暴露不足,
最终导致结果的极不稳定[ 3] 。本实验表明: 微波
炉加热只发生中心蘑菇状分布, 当放入较多切片,
偏离中心的切片抗原暴露受到影响, 故微波修复
阳性定位好, 但不够稳定。酶消化法对上述抗体
定位稍差, 不易控制。而高压修复法效果最佳, 阳
性定位清晰、非特异性着色弱, 背景着色浅。因为
电磁炉加热较缓慢, 有利于抗原修复, 故采用电磁
炉加热的高压修复法, 能使阳性率提高, 且方法简
单、经济, 这对临床病理诊断和科研工作都具有积
极的实用和推广价值。
参考文献
[ 1] ,王晓秋. 免疫组化染色前抗原修复法的合理选择
[ J]. 临床与实验病理学杂志, 2006, 22( 3): 367-368.
[ 2] .吴计生, 段淑云, 郝建平, 等. 免疫组化抗原修复的应
用进展[ J]. 实用医技杂志, 2006, 13 ( 20 ): 3592-
3593.
[ 3] .智俐, 贾军乐. 免疫组化技术中抗原修复的应用[ J].
包头医学院学报, 2006, 22( 2): 204-205.
[ 4] .刘俊, 陈宣世, 龙汉安, 等. 三种不同抗原修复法对二
种免疫组化染色法的影响[ J]. 泸州医学院学报,
2004, 27( 5) : 440-441
[ 5] .毕晓芳, 陈利萍, 方虹, 等. 不同抗原修复方法对免疫
组化染色结果的影响[ J]. 宁夏医学杂志, 2006, 28
( 1): 50-51
2011-01-08收稿

文章转载于《医药论坛杂志》2011年4月 第32卷 第8期
作者：彭凤英
作者单位：福建省肿瘤医院病理科, 福州 350014

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