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请教丁老师关于冰冻问题

片子核灰蒙蒙的,应该是你片子没有立即固定,细胞退变引起的。玻片粘上组织后,立即放入固定液,不能在空气中停留数秒。
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在空气中放置20秒钟左右,的确会减少细胞间的收缩(如含水量高的组织:软组织肿瘤、脑组织等可以采用),但容易引起细胞的退变。立即放入固定液,不会引起组织开裂,4度固定液与室温固定后组织的收缩差异很小,用肉眼很难区分。因此大多数组织,只有立即固定,才能做出最有利于诊断的冰冻切片。
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冰冻切片脱片的原因主要是细胞成份少的组织:如胶原含量较高的组织、软骨组织等,如果切片厚就容易脱片。干燥后固定,尽管所谓的切片完整了,但这些脱的组织并无多少诊断价值,而真正诊断需要的细胞核却发生了退变。如何在细胞核不退变的情况下把这二种组织全部不脱,是解决问题应该思考的方向,而不是仅仅只是不脱片。
解决方法:
1、把片子切薄(5-6微米),切平整,99%的片子都不会脱,我们很少会有脱的片子。当然不是切片机刻度多少就是多少厚,刀要快,冷冻温度要适中,还要在切片技术上下一点功夫。
2、在95ml甲醇或95%乙醇内加5ml冰醋酸,可以减少脱片,特别如甲状腺胶质。
3、苏木素染色不要加热,一般室温1分钟即可。
4、玻片要干净,不要用手抓在需要粘组织的区域。
       当然,干燥技术并非完全不能用,当组织含水量较高的组织:如脑组织、软组织肿瘤,如果立即固定,会使间质收缩成网状。此时,可以做二张切片,一张快速固定,诊断医生可以看细胞核的结构;另一张略干燥,可看完整的组织结构。
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哈瑞氏苏木素配好不用,用瓶子装起来,一定会有氧化膜,这是正常的。
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只要有氧化就一定有,吉尔苏木素只是氧化剂不一样,氧化强度不一样,出现的时间不一样。随着存放时间的延长,着色力也越来越强,但时间过久后,苏木素过氧化,即使不用,染色力也会减弱,甚至不能用。
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