二氧化碳冷冻切片
二氧化碳冷冻切片
a)先将组织放入加热的20%甲醛溶液中固定1~2分钟,水洗(也可将组织不经固定直接放在切片机的冷冻台上)
b)放在切片机的冷冻台上,加少量水,打开二氧化碳开关,此时有二氧化碳气体喷出,待组织出现冷霜后,关闭二氧化碳
c)切片,切片厚度6~8微米,将切出的片子放于水中舒展,用镊子将组织平铺于载玻片上(如未固定组织的切片直接用载玻片粘贴,立即放入甲醇中固定2秒,然后进行染色,)
d)加热烤片,烤片温度不宜超过60℃,更不能将组织烤焦。
e)染色时将苏木素滴加在载玻片上,加热1分钟(60℃左右,不能将苏木素烧开,以防切片脱落)
f)水洗
g)盐酸酒精分化1秒钟
h)水洗,温水蓝化
i)伊红2~5秒钟
j)梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。