dingwei

别把酒精时间缩短，组织脱水没有脱过的概念，只有脱水不够。组织发脆原因是组织内蜡没有充分浸进去。组织脱水过的概念本身就是错误的，不信你们可以把小组织在每道酒精里放10天看看，组织会不会发脆，就是动物肝、子宫肌瘤、癌组织、胃镜我都放过，都不会脆。所以不要用老经验（所谓的经验很有可能会被错误的观念所误导）或老师的说法去做事，自己多动动手，认真观察和思考。
你的问题可能是酒精浓度太低（95%只有90%），温度太低，时间太短。建议95%过夜（每95ml95%酒精内加入无水5ml），无水每道增加至2个小时以上，或无水酒精过夜，都没有问题。

dingwei

说不服谁并不代表你的水平，明年有个全国常规切片比赛，你去试一下，看看能不能拿到第一，如果拿到前三，说明你真有水平，如果什么都没有，说明你只是自我感觉。我服的人很多，如上海肿瘤医院曹老师，我们科的姚老师，浙江省肿瘤医院的胡老师，诸暨人民医院的骆老师，还有广东人民医院的骆老师等等，他（她）们都是切片一流的高手。
组织切得破碎，的确有方法补救：如冰与不冰、冰的程度、热水、涂氨水或稀盐等等，这不等于说这些组织脱水是好的，脱水好的组织，根本不会破碎，那怕是血凝块。高质量的切片来自于组织处理好的蜡块。切片的方法有很多，的确需要学习的，如动物肝脏，由于本身质地比较细腻，如果脱水不好，不会脆，很但容易脱片或拱起，但人们往往认为不脆就是脱水好的；只要脱水好了，就会脆，但只要不冻，冰水一过，就切得很平很完整，也不会脱片。所以正确认识一种现象和正确的处理很重要。

dingwei

我就是做切片的，83年开始切片，常规、特染、免疫组化都做。曾经做过几年细胞学诊断，但现在还是技术员。不过现在切片可能还真切不过你，因为我好久没切片了。
1微米切片，什么叫真正的1微米你懂吗？
只要刀不快，组织块不冰，机器不精确，切得慢，组织块处理不好，切1微米都是很简单的事，因为这都不是真正的1微米。
而这些条件都达到了，切1微米的切片问题不在切，而在于展片，因为你的刀能切出来很难展片，用普通钢刀或一次性刀能切出连片，那肯定厚度不是1微米。切片一般4微米就行了，但因为是一次性刀片、切片手法又不是很对，机器精确性也没那么好，所以很多人都在切2微米、3微米，其实真正的厚度可能都在4微米以上。
做极端的东西只能说在某一个方面有本事，不代表病理技术的真正水平。参加切片大赛的都是小技术员，像我们都是让刚来二三年的去参加，还要参加省内选拔，如果省内都过不了关，更不要说全国了。
致于说诊断需要的片子有多少质量，我可以肯定的说，这和在什么单位的性质没有关系，和你单位的水平有关系。你应该多出去见见世面，不要让单位1个老技术员就把你搞得不知道东南西北，因为老同志们都没有经过正规的学习和培养，大多数人的切片质量都没有现在年青同志做得好。你比他做得好并不代表你真的好，有些片子看起来切得很平整其实也不好，如镜下细胞打滚、细胞收缩、核浆不清、片子厚等等。
这世界没有最好，只有更好。

dingwei

引用:

原帖由 llj19971997 于 2012-11-28 21:59 发表
后辈是需要尊重前辈的，无论好与不好，他们都为我们的成长提供了经验。所有带过我们的人，都是我们的老师，包括在这里指点过我们的陌生人。过度自我膨胀让我想起“东方不败”
不过单纯从这次讨论中我还是学到许多病 ...

组织脱水时间长了，会引起细胞的收缩，但不是你说的像调亡一样的收缩，主要表现在间质、纤维平滑肌的收缩，导致间隙增大，而实体细胞往往不是很明显。所以脱水过间过长并不好，我说的过长是每道酒精都停留几天，而常规脱水决不可能出现这种现象。你说的像调亡一样的收缩往往是切片染色后用电吹风吹干或烤箱烤干引起的，那怕是自然干燥 ，也会出现，就是程度好一点；还有就是第一道酒精浓度过高引起。

dingwei

说得很对。科研单位和医院最大的区别不在于技术，而在于时间。科研的组织你可以用最好的流程慢慢去做，而医院必须在规定的时间内把组织做得最好，而时间往往是不够的，所以让医院的人的思维和想法变得很局限。国外很少有人说组织会脱水不好，因为他们处理组织很规范，多少时间就是多少时间，几天出就是几天出，而我们今天取材，明天要做出来，后天要发报告，1个小时要切上百个蜡块，这样做你怎么做也做不出最好的片子。

dingwei

引用:

原帖由 wxhwxh 于 2012-11-29 15:07 发表
这次讨论确实学到了不少东西，尊重前辈是必须的，但是学习新技术也是刻不容缓的。有了问题能解决非常高兴，关于切面组织碎末状，跟组织包埋时保温盒的温度有没有关系？请教老师，我每次包埋完，取下蜡盒后，那个钢化 ...

钢化磨具的底面这点温度与碎末没有关系。蜡缸的温度太低，不利于把蜡浸透，如果过夜可以。一般在62度左右。

dingwei

我们设定的lica  asp300 脱水机  程序
中性甲醛 4h ，75酒精2h ， 85酒精2h ，95酒精2h   95酒精2h  无水酒精1.5h， 无水酒精2h，二甲苯45min*2，
蜡15分钟，蜡30分钟，蜡1.5h    蜡稳定62度   大小组织在一块脱水没关系。

dingwei

是的

dingwei

1、脱水的酒精里混有伊红不会影响组织脱水，无论是组织脱水还是切片脱水流程。
2、脱水中性甲醛后需要水洗。主要是可以防脱片和抗原的长期保存。
3、蜡没有充分浸进去原因主要是脱水不佳，要看是怎么形成的，如果固定不好，就要廷长固定的时间；如是是脱水不好，就要廷长脱水时间，主要是低浓度酒精的时间。

dingwei

固定不好，不管你用多少时间脱水，还是软绵绵的。蜡基本上没有浸进去。
具体要区分，还是有点难。
一般看你取材，如果标本很新鲜，那一般总是固定的问题。
脱水不好，为什么要“要廷长脱水时间，主要是低浓度酒精的时间。”  这个问题讨论很多次了，首先你得想一下为什么消毒用75%酒精而不用95%酒精？