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免疫荧光染色问题,求助!

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原帖由 白杨小小 于 2007-11-20 19:41 发表
请问冰冻切片免疫荧光染色中如果triton浓度过高或作用时间过长是否会导致背景过深,定位不准确,如应该是细胞核定位却出现细胞浆染色,10um的冰冻切片triton浓度和时间应该多少合适?;另外冰冻切片DAB显色一抗浓度1:1 ...
冰冻切片为什么要用triton?

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原帖由 白杨小小 于 2007-11-21 21:09 发表
我是做小鼠脑组织冰冻切片,多聚甲醛固定,一抗是在核内表达的转录因子,该抗体说明书要求用0.3%PBS/triton 稀释抗体,可是片子背景很深,胞浆染色而不是胞核染色,不知道什么原因,请赐教!
你的切片不厚(<=10u),没有必要用triton,一般的PBS就可以了。
另外你仔细看一下一抗说明书,能否用于甲醛固定的组织切[片。如果说能,那就要怀疑一抗的特异性是否有问题。 你说背景很深,那么isotype control 如何?

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看来一抗有问题。你是从那里买的?

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最好去问Cell Signaling Technology.

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