sjfm139139

各位老师好：
      我刚开始做小鼠腹主动脉（直径大约2mm）的石蜡切片，但每次切的时候组织都碎掉，中间只有留下一个小洞。后续的工作也就没办法继续了。
      由于组织很小，每步骤的时间都缩短：     70%乙醇 1小时
                                                            80% 乙醇30分钟
                                                            90%乙醇一、二各十五分钟
                                                            无水乙醇一、二各十五分钟
                                                            二甲苯一 2分钟   
                                                            二甲苯二数秒钟
                                                            石蜡一半小时
                                                            石蜡二四十五分钟
        由于条件限制没有定向包埋机，每次都是自己用镊子竖直血管，手工包埋，导致石蜡先后凝固，有裂隙。
        最终导致切片时总是只剩下一个洞。
        已经试验过四五次了，还是没有什么进展，心里万分着急，希望得到各位老师的帮助。谢谢！

folksmile

啊！不是包埋的事吧，看起来像脱水的问题列，呵呵

sjfm139139

切片的时候冻腊块是不是很重要啊 ，可以防止碎片 ？

Ariel

我也正在做小鼠血管的石蜡切片,切片时蜡易碎,并且该有组织的地方都是空的,根本看不到血管.一开始怀疑是新蜡,后来反复熔了三次,再次包埋,还是不行!
  脱水时间如下: 70%酒精 24h    80%酒精24h    95%的 30分钟  95%的 30分钟  100%酒精 30分钟   100%酒精30分钟      100%酒精:二甲苯(1:1) 10分钟     二甲苯 20分钟     浸蜡1 10分钟   蜡二 20分钟
    包埋.      
       所有脱水都是手工做的.  请教本实验室的师兄们,他们没有遇到这样的事情!
   请高手指点! 我把所有的血管都包埋了,现在还有没有挽救的余地啊!
      否则,我死定了!

Ariel

肯请高手们指点啊!  都怪急死人了.......

zhaojian

100%酒精再延长十五分钟，二甲苯各延长十分钟，浸蜡延长一个小时。拭一拭

lucyyan

70%乙醇          30分钟
80%乙醇          30分钟
95%乙醇（1）   30分钟
95%乙醇（2）   30分钟
无水乙醇（1）   15分钟
无水乙醇（2）   15分钟
二甲苯（1）      2-3分钟
二甲苯（2）     透明为止
石蜡（1）       1小时
石蜡（2）       1小时
试试这脱水时间

guwei3550

这么麻烦啊!我也是新手帮不上你什么忙了,我也是做血管的,还没有杀死呢,我想问问你,血管取下后就直接放到固定液里吗?那管腔会不会塌陷了呢?怎么防止呢?谢谢!

Ariel

请问,我那已经包埋的血管是不是就不能再回头脱水和透明了.
因为我所有的小鼠血管都浸蜡包埋了,如果不能回头,我该怎么办啊?
   片子都切不出来,我还怎么做免疫组化啊?

Ariel

我的小鼠血管是取下后就直接固定的,管腔应该会塌陷的.同学说应该先灌流的, 先PBS再固定液灌流,效果会好些! 当时嫌灌流需耗时,费事,就没有做.
我想还是应该做的.
  现在我的片子切不出来,可能跟这个也有关系吧!