mishell

我使用乳癌的切片（样本片）做C-erbB2染色，同时做阳性对照，阳性对照强阳性，而样本片阴性，但是同样的样本片其他医院做出中强度阳性结果，还有CK(34beta E12)也会出现这样的结果。不知道原因在哪里？因为做阳性对照的结果是阳性，说明实验操作步骤基本没问题，那么就在于我们使用的抗体厂家不一样，但是不同厂家的抗体出现如此大的差异可能吗？如果是这样，那么我们只用一个厂家的抗体对于结果的可信度该如何把握呢？

mishell

请大家帮忙分析一下

dingwei

阳性对照片选择有问题，我们选择阳性对照片都喜欢用强阳性的切片，这种片子做出阳性结果，只代表你的操作过程没有问题，不代表你的抗体稀释比是正确的，抗原修复就是正确的：强阳性的组织很稀的抗体也能很好表达，而中等阳性、弱阳性的就可能不表达。正确的阳性对照片应该选择：强阳性、中等阳性，弱阳性三种组织结合的片子，只有这样，才能真正找到问题。

mishell

谢谢丁老师，C-erbB2也做了中等强度和弱阳性片，也都可以出现较好的阳性结果，至于更改抗体稀释比例还没做过，接下来我更改抗体稀释比例试试。

savant0196

现在各公司提供的抗体质量都差不多了，出现明显差异的情况少见，象你这样自己做的是阴性，而别人做的是中等阳性，应该不是试剂的问题，而是操作的问题。建议进一步前往上级医院进行学习，以改善免疫组化的操作，避免这种假阴性或假阳性的情况发生。另外二抗也是关键，建议购买好点的试剂。

mishell

现在我还遇到这样的问题，做Ki67肠癌的免疫组化染色，同样的组织，不同公司的抗体，抗体稀释比例一家是1:100,一家是1:25,做出的结果是1:100是强阳性，1:25是弱阳性，且着色范围也小很多。我还做了Ki67鼠单克隆抗体和KI67兔单克隆抗体，所做结果是阳性强度差别不大，但是着色范围有差异，Ki67鼠单克隆抗体在正常的肠腺体中为阴性，而KI67兔单克隆抗体在正常的肠腺体中有散在表达，这种情况该如何分析呢？请大家帮忙讨论~~~

shanghainese

即使是抗同样抗原的抗体：
1. 不同的单克隆会有不同的结果。
2. 不同的批号的多克隆会有不同的结果。
3. 不同的浓度下，抗体会有不同的结果。
4. 不同的操作步骤，会有不同的结果。
5. 不同的温度和时间，会有不同的结果。
........................................
........................................
........................................
........................................