rongye_xj

[ 本帖最后由 rongye_xj 于 2009-5-10 21:48 编辑 ]

rongye_xj

rongye_xj

处理程序：中性缓冲液固定   3小时
                 70%、80%、95%、95%酒精各一小时
                 100%、100%酒精各45分钟
                  二甲苯（1）、二甲苯（2）各1小时
                  浸蜡三小时



结果：标本软，没有硬度，包埋时浮于蜡上不下沉。切片时组织没有硬度切不下来，切过的蜡块在室温下放置几个小时后组织处凹陷、变干。

回炉处理：二甲苯  30分钟——梯度酒精（高——低）洗脱二甲苯——固定3小时——……（同上程序）

结果：组织干，硬，制片困难，染出的切片如上。


请大家帮忙分析原因。此程序之前处理标本一直很好，近两日出现此现象，跟换了新液体后情况更糟糕。

rongye_xj

rongye_xj

ChenRong

1，你的组织蜡没有侵入。问题在于你的脱水不彻底。
2，按照你的脱水程序不大会弄成你这个样的啊？？，会不会试剂不纯？
3，二甲苯两个时间常温时只要1个小时。（二甲苯有饿、问题吗）
4，是机器脱还是手工拎？如是机器，什么机器。
5，你的包埋是手工还是机器。
6，以前一直这个样还是就最近，如是最近想想有什么变动，如：机器修过，试剂换过（还错了，如二甲苯换成了酒精之类的）。
7，不要叫我老师，我只是打字多点。请其他同行都来打打字。讲讲。。。

ChenRong

忘了，固定也是个问题。

qibaomeimei

嗯 我也曾经碰到过这样子的。机子出毛病，蜡块晾外面风干了，我怕脱水不彻底，过30min无水微波低档加温，透明，浸蜡，出来其他组织都还可以，就淋巴结像上面那样模糊不清。后来又有一次风干，我直接透明浸蜡，脱水不彻底，虽然不好切，但是没有上面的问题。（固定过才卡缸）

黄树叶

从组织上来看   脱水是不干净了   原因我觉得是不是标本漂浮起来了   没有浸透   也就是说你机器里的液体太少了呢？

rongye_xj

我们用的是湖北泰维的和leicaASP300脱水机，之前一直是这样，leica那天跟换了液体后机器就这样了，初步考虑是酒精的问题，再次跟换后问题就没有了，到目前也不明白是怎么回事。湖北泰维的国产机是之前液体量为液体缸的一半，处理的都还是挺好的，leica出了问题后就为防万一也把液体跟换并量加大了，结果…… 所有机器都一样出问题了。过了个周末，它们自己又好了。
我们的组织处理和包埋全是机器，染色封片也是机器。
问题出现后考虑固定的问题了，加大固定液量和时间后整批标本同前。
总结了：应该还是脱水问题。其他都可以排除了。（其实自己还是没有彻底搞明白，只是找不到其他原因了）
谢谢各位老师的指导。