自动染色机应用于快速冰冻切片染色的可行性探讨
近年来全自动染色机逐渐被各大医院及相关实验室所接
受并替代常规石蜡切片HE 染色和脱落细胞学涂片HE 染
色，国内已有很多使用自动染色机的报道，染色效果好，减少
人力，但是使用自动染色机应用于快速冰冻切片尚未见报道，
在几年的工作中，通过实践摸索，选用了最适于本科室的染色
程序提高了快速冰冻切片效率和质量，现介绍如下。
1 Leica ST5020 自动染色机的使用和结果
1.1 仪器设备德国Leica ST5020 自动染色机(26 个试剂
缸，6 个水洗缸，2 个烤片箱，2 个进口位，2 个出口位， 附塑料
玻片架等)
1.2 试剂乙醚-乙醇溶液，95%乙醇，harris 苏木精，l%盐酸
乙醇，1%水溶性伊红，无水乙醇，二甲苯。
1.3 操作方法(1)先将冰冻切片载玻片的磨砂面标出组织
块的编号，然后将切出的切片用乙醚-乙醇固定[1]，固定1 min；
(2)再放入染色机配套的玻片架中置入自动染色机的进口位。
根据颜色自动选择相应的程序开始染色；(3)染色结束，染色
机的机械臂自动将玻片送入封片机准备封片；(4) 封片结束，
仪器发出提示音，从升降上取下，贴标签。
1.4 冰冻切片HE 染色程序由于机械臂的行进线路并不
是单一的直线型，存在特定的迂回性，为了缩短时间，减少污
染[2]，结合本科室的实际工作情况设定了HE 染色的染色程序
(表1)。
可以保证在冰冻切片和常规石蜡切片同时染色时优先染
冰冻切片。
1.5 结果经长期的操作发现应用自动染色机染色后整个
术中冰冻切片时间不超过15 min，染色后的组织结构完整，
细胞染色清晰且境界清楚，核质分明，对比度好，如图1、2
所示。
2 讨论
随着病理技术的发展，冰冻切片检查不仅是鉴别良、恶性
肿瘤准确快速的方法，还广泛应用于脂肪黏液染色[3]、酶组织
化学、免疫组化[4]、免疫荧光、核酸原位杂交及原位PCR 等病
理诊断与研究领域。切片的质量不单是技术问题，它的优劣对
病理诊断的准确性至关重要，对能否缩短手术等候的时间，减
轻患者痛苦起着重要作用[5]。而现在术中冰冻越来越多，而传
统的手工染色会因天气、染色时间、试剂的浓度、环境、个人差
异等因素而使胞质、胞核染色深浅不一， 对比不均。Leica
ST5020 染色机可同时处理12 个玻片架， 每个玻片架容量是
30 个样品玻片，样品处理量大，同时处理多个不同程序，且自
动染片机因为预先设定好染色程序、时间，使每一次的染色步
骤和时间均能一致，胞质、胞核结构对比清晰，染色鲜艳、均匀，
且省时、省力[6]。与封片机联机应用，染色封片自动完成，节省人
力，工作效率高，稳定性好，无掉片现象，对操作者的身体伤害
轻。在这期间可进行下一个冰冻切片的冰冻和切片过程，切完
把片子固定后上机， 然后再把上一个染好的冰冻片核对贴标
签，因此可处理术中源源不断送来的组织进行冰冻切片，有利
于及时、准确发出冰冻快速病理报告，工作效率大大提高。
但我们发现由于机器本身的特点， 具体操作时有一定的
局限性，机械臂的起落都需要有一定时间作自我调整和检测，
最关键的因素就是时间的预测问题。当同一染色机里的染色
架≤4 时， 机械臂的起落时间不易起冲突， 便于计算出片时
间。同一染色机里的染色架>4 时，由于机械臂的起落时间及
染缸的使用会发生冲突，会明显拖延出片时间，可预测性差[2]。
另外，影响冰冻切片的质量关键在设定好染色机的3 个参数：
MUMBER OF DIPS(浸液次数)、LIFTING SPEED(提升速度)和
DIP AMPLITUDE(浸液幅度)，增加浸液次数能增强脱水效果，
但会减少仪器处理量，延长时间，提升速度指示玻片架从试剂
缸移出的速度，速度越慢携带的试剂越少，但时间增加，速度
太快易掉片，浸液幅度大、染色机的水洗太都会增加时间，我
科把MUMBER OF DIPS 设置为3 (可选范围1~9)，LIFTING
SPEED 设置为2 (可选范围1~9)，DIP AMPLITUDE 设置为2
(可选范围1、2)。
综上所述，当Leica ST5020 染色机里的染色架<4 时，冰
冻切片的染色可与石蜡切片的HE 染色同时进行， 染色效果
稳定， 节省人力， 且能优先染冰冻切片； 如染色机里的染色
架≥4 时，只能手工染色。
表1 冰冻切片HE 染色程序
步骤 试剂缸位置 试剂 时间 精确 浸液
1 9 水洗缸 0:00:10 是 是
2 21 苏木素 0:03:00 是 是
3 10 水洗缸 0:00:10 否 是
4 22 1%盐酸乙醇 0:00:02 是 是
5 11 水洗缸 0:00:50 否 是
6 23 伊红1% 0:00:05 是 是
7 24 95%乙醇 0:00:05 否 是
8 32 100%乙醇 0:00:10 否 是
9 33 100%乙醇 0:00:10 否 是
10 29 二甲苯 0:00:20 否 是
11 封片 封片程序
注：精确计时的步骤在程序中指定为“是(精确时间)”，比如说
苏木素、盐酸乙醇、伊红，可以保证在冰冻切片和常规切片同
时染色时优先染冰冻切片
[[参考文献]
[1] 张乃鑫. 临床技术操作规范-病理学分册[M]. 北京: 人民
军医出版社, 2004:36-38.
[2] 孔静萍, 王红卫, 张雯静, 等. Leica 自动染色机盖片机的
使用体会[J]. 现代实用医学, 2008, 20(6):482-482.
[3] Soans S, Galindo LM, Garcia FU. Mucin stain on frozen
sections:a rapid 3-minute method[J]. Archives of Pathology
and Laboratory Medicine, 1999, 123(5):378-380．
[4] Richter M, Nahrig J, Komminoth P, et al. Protocol for ultrarapid
immunostaining of frozen sections[J]. J Clin Pathol,
1999, 52(6):461-463.
[5] 杜文越. 冰冻切片技术在病理诊断中的应用[J]. 河北医
学, 2002, 8(11):1022-1024.
[6] 罗小平,李广民,胡维维．自动染片机在HE 染色中的应用
及与手工染色的比较[J]. 诊断病理学杂志, 2007, 14(3):
l79-179, 189.
文章转载于《南通大学学报（ 医学版）》2010 ∶ 30（6）
作者：王伟， 施公胜*， 刘益飞
作者单位：南通大学附属医院病理科， 南通226001
