sally

免疫组化反蓝失败怎么办?阴性对照很好,我是用自来水反蓝,四月份做的时候很好的.还有我用0.5％盐酸酒精分化的，什么叫分化？分化后组织立即变红了，然后就很难变蓝！
我很急，想快点做完实验休息去，这里很热啊。
这里人好，但是就是大家在此时间不多，所以不能得到及时回答，

dingwei

引用:

下面引用由sally在 2003/07/25 10:39pm 发表的内容：
分化后组织立即变红了，然后就很难变蓝！

分化后用冷水洗后，用温水很快就能蓝化。你要心急，也可用用过的TBS或PBS蓝化，流水洗。

临风揽月

其实做完免疫的片子只要淡染就可以了，不要分化！

sally

我做了试验才回来,谢谢大家的指点!我发现你们都生活很规律哦,没有人熬夜,所以一早上这么多的回言,我很感激!
今天发现,阴性对照片很不错(反蓝),阳性组织很差,几乎全是一片棕色,当然预期该出现棕色的部位就深一些,颗粒状也比较明显,就是背景颜色太深了!我自己分析有几个原因,看看各位老师意见如何?
1:该大鼠肝脏是我的同学作的动物部分试验,我做检测部似乎他配的甲醛配方不对,稀了,我听他说后就指出纠正,但是已经固定3天了.
2,肝组织内的细胞很多空泡状改变,没有层次感,模模糊糊的一大片,感到标本很不好,会不会抗原扩散?
3,如果说是非特异性背景着色,以下原因:
1)我冲洗干净了,可以肯定
2)试验中切片没有干燥,保持了湿润
3)过氧化氢孵育了15分钟,
4)血清蛋白封闭也有10-20分钟(后来我做的是20分钟
5)组织抗原弥散?和固定液有关?
光镜下组织很模糊,去病理科作包埋的时候我就发现有一些组织是暗红色的,而正常的应该是黄色,对吗?
究竟问题是什么?我真的很迷茫,这种情况下非常苦恼,反看第一次记录(我做了4次了)那是用0.1%盐酸分化的，倒也蓝一些，后来换用了0.%盐酸酒精，反而不行了
最后请问老师们，分化的作用是什么？
我的邮箱：suolala@sohu.com,谢谢各位不吝指教！要是能电话请教就好了！
3)

sally

我的苏木素是武汉千色公司的,装在小瓶里，不需要配,直接滴上去就可以了。
我感到是不是DAB有问题啊？滴上去不到半分钟就很深的颜色了，我按照说明书配的：850微升双蒸水，DAB试剂各一滴。
阴性对照是蓝色的－－说明反蓝没问题；滴加了一抗的颜色就很深，有背景，参看阴性对照很蓝的背景的话，问题不应该是DAB？那么是一抗的问题？我做的是CTGF，Smad
我胡思乱想了，气候炎热，思维也很散乱，感到没有头绪了。40度的高温，心情也快沸腾了
谢谢各位老师

myy

我做的免疫组化不多，我的感觉是试剂着色的地方苏木素就不容易上色。另外，我想免疫组化应该是在空调的房间里作才好，而您那儿居然是40度？——试验室外？