梅花

丁老师，您说冰冻固定用甲醇好，可是我们科用甲醇固定染出来的片子核灰蒙蒙的，你们那儿会不会？丁老师，冰冻切片染色好的标准是以核接近石蜡切片为好还是核大些与细胞真正的形态相近好？我科用含甲醛的固定液，细胞较收缩。

xkj2797xkj

冒昧回答下，用95%酒精固定效果会很好！

梅花

95%洒精固定也会蒙。

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那就要看你的染液是不是有问题了！

dingwei

片子核灰蒙蒙的，应该是你片子没有立即固定，细胞退变引起的。玻片粘上组织后，立即放入固定液，不能在空气中停留数秒。

siliang420

我觉得不应该立刻放入固定液，刚粘好的组织温度还在负的15度左右，而固定液的问题一般在十几度上下，所以要在空气中适当放置20秒钟左右，要不容易引起组织开裂等情况，若是想要直接放入固定液，个人建议最好将固定液的温度保持在4摄氏度左右，固定3分钟足矣。固定液最好是甲醇。

dingwei

在空气中放置20秒钟左右，的确会减少细胞间的收缩（如含水量高的组织：软组织肿瘤、脑组织等可以采用），但容易引起细胞的退变。立即放入固定液，不会引起组织开裂，4度固定液与室温固定后组织的收缩差异很小，用肉眼很难区分。因此大多数组织，只有立即固定，才能做出最有利于诊断的冰冻切片。

Tony

Carson博士讲最好用47%的甲醛

xkj2797xkj

本人做了个对照，冰冻时切好两张子宫肌瘤片子（一块组织），一张加固定液（95%酒精），另外一张不加固定液，染色出来，加固定液的颜色很清晰，上色很好，不加固定液的组织有些朦胧，伊红上色不是很好，所以，切好要马上固定！

梅花

马上固定对间质成份多的组织容易引起脱片，95%乙醇固定也会朦，染液才用2周，常规切片还蛮好用的，应该没问题，明天我用更新的染液并立即固定，看结果如何，