[求助]心脏灌注断头取脑
灌注方法如下:
准备好生理盐水500ml,4%甲醛溶液2L(建议使用甲醛粉末配置,蒸馏水加热溶解后过滤4度冰箱保存,可直接使用,无须放置至室温.如用40%甲醛配置,实验效果不佳.如果是准备做免疫组化,可用PBS溶液代替蒸馏水配置甲醛溶液),另外还需要准备灌注器具,就是医用的输液器,不过最好输液瓶是底部开口的,有卖的.最大号的针头,将针尖磨平磨钝就可以使用了.
大鼠麻醉后开胸腔,剪开右心室,插入针头至体主动脉,体主动脉处穿线扎牢针头,防止滑脱,剪开左心耳.迅速灌入生理盐水,将血液冲净,流速越快越好.待生理盐水将灌完时,及时倒入甲醛溶液,注意更换甲醛溶液时以及整个灌注过程,千万不要将空气带入(十分重要,一旦形成空气栓塞,灌注会不完全,固定不佳,直接影响标本质量).灌注甲醛先快后慢,最后以一分钟100滴左右的速度将2L甲醛溶液灌完.输液器保留一定液体,防止灌入空气.
拔下针头,输液器用生理盐水冲洗,防止甲醛腐蚀,以免下次无法使用.
剪下鼠头,取出鼠脑,泡入甲醛溶液后固定.灌注成功的鼠脑洁白完整较硬,无肉眼可见的血管.如果需要做冰冻切片,后固定一天后,可再泡入40%蔗糖溶液一天,行冰冻切片,如此可防止冰晶的形成.
如果还有问题,可以和我联系benbendidirain@hotmail.com.希望这些对您有用.
