塑料包埋制片技术
塑料包埋制片技术
用塑料包埋切片能制备高质量的组织切片，与石蜡切片相比，具有细胞收缩小、结构清晰、分辨力高等优点，但由于操作复杂，费时又费刀，故除骨髓等有特殊要求的切片外，很少会有人使用此方法。
1、 取材：要求修成2 mm厚的薄片。
2、 固定：10%中性福马林或Bouin’s液。根据标本大小固定时间为：2～4小时不等。
3、 脱水：组织块脱水用梯度酒精（80%、95%Ⅰ、95%Ⅱ、100%Ⅰ、100%Ⅱ）。较大的组织（10x15x2mm）每步30～60分钟；中等组织（5x5x2mm），每步15～20分钟；小组织（3x3x2mm），可不脱水，直接入浸透液。骨髓组织可用5%硝酸脱钙，或不脱钙直接脱水、包埋。脱水时间比同样大小的组织长2～3倍。
4、 浸透：取甲基丙烯酸-2-羟基乙基酯(HEMA )95ml，聚乙二醇（PEG-400）8 ml，过氧化苯甲酰0.7g，混匀溶解后置于棕色瓶，4℃备用。浸透时间为24～48小时，其间更换一次浸透液。
5、 包埋：A液：即浸透液。B液： PEG-400 20N ml， N-N二甲基苯胺1 ml混合，摇匀溶解后置于棕色瓶，4℃备用。包埋剂必须在使用前配制，按A、B二液以100：3的比例混合，稍加搅拌便可使用。经浸透的组织块置于塑料模具内，注入包埋剂，放置30～60分钟（室温高于18℃可放置于冰箱中），待包埋剂完全渗入组织后，在包埋模具上加盖，在室温中放置，使其聚合，成型后便可切片。
6、 切片：先用钢锉修整聚合块，四周尽量修至靠近组织，表面修至组织完全暴露，用常规石蜡切片机切片。切片厚度可切1～2цm。
7、 展片与烤片：用40～42℃水温展片，捞至干净载玻片，60～80℃的温箱烤片1小时左右。
8、 染色与封片：塑料切片染色前不必脱去包埋剂，直接染色。苏木素3分钟，水洗，盐酸酒精分化1～2秒钟，水洗，温水蓝化，伊红2-5秒钟，水洗，吹干后中性树胶封固。
