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常用HE试剂配制

常用HE试剂配制

[这个贴子最后由dingwei在 2003/01/09 10:39pm 编辑]

                                常用HE试剂配制
一、苏木素
(1) Harris苏木素:
         配方:
         苏木素       1 g            无水乙醇         10 ml
         蒸馏水       200 ml         钾明矾           20 g               
         HgO          0.5 g
    先将苏木素溶于无水乙醇中,备用。把明矾放入蒸馏水,加热溶解,再加入备用的苏木素,煮沸 2 分钟,先加入少量的氧化汞,防止氧化过程中苏木素外溢,玻棒搅拌,然后,边搅拌边加入氧化汞。加完后,立即移至冰水中,加速其冷却,静置一夜后,过滤。用前以 5% 的比例加入冰醋酸。如配好后时间较长,冰醋酸的量可适当多加一点。冰醋酸的量,可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了,会造成核浆共染,背景不干净;加多了,核着色能力下降。此液可放置3月至半年左右,视气温而定。使用期要看染色的切片量来定:以每天100张片的量,可使用半个月左右。
(2)Gill改良苏木素液
     苏木精       2  g            无水酒精     250 ml
      硫酸铝     17.6 g            蒸馏水       750 ml
      碘酸钠      0.2 g            冰醋酸       20  ml
    先将苏木精溶于无水酒精,硫酸铝溶于蒸馏水,然后两液混合后加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。此液为半氧化苏木素液,不会产生沉淀,氧化膜少。是进行性染色的配方,不用分化,染色时间在4-10分钟左右,效果很好。特别适用于染色机染色。

二、伊红
(1)伊红(水溶性)
    配方:
    伊红 (水溶性)         2.5-5 g   
    蒸馏水                  500 ml
    将水溶性伊红溶于蒸馏水中,然后加浓盐酸10毫升,充分搅拌,静置过夜后过滤。过滤后的沉淀用蒸馏水冲洗二次,再过滤;将沉淀物连同滤纸一起放入温箱内干燥,加95%酒精1000毫升,配成饱和液。使用前再用95%的酒精 1:1~2倍稀释,加入1~2%冰醋酸。
    此方法具有染色时间快,颜色鲜艳,不容易褪色,使用寿命长等特点。
(2)伊红(醇溶性)
      配方:
    伊红 (醇溶性)         2.5-5g   
    75%酒精                1000 ml
    加几滴冰醋酸至半透明状。

三、 固定液:
(1)12%中性福尔马林(pH7.0)
甲醛              120 ml
NaH2PO4·H2O       4 g   
Na2HPO4            13 g   
蒸馏水            880 ml
(2)12%酸性福尔马林(PH 4.5)
甲醛                 120 ml
水                   830 ml
冰醋酸               50  ml
(3)12%福尔马林
甲醛                 120 ml
水                   880 ml

(4) Bouin 固定液
饱和苦味酸              75  ml
甲醛                    25  ml
冰醋酸                   5  ml
四、盐酸酒精分化液:
     浓盐酸        0.5~1 ml
     75%酒精         99 ml

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常用HE试剂配制

最关键的那一步你还没说呢,加氧化汞时是在液体沸腾时加吗?还是先撤火再加,每次做到这一步时我都有些担心怕掌握不好加入的时机,和危险性。

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氧化汞时是在液体沸腾时加,先加一点点,然后再略多一点,只要不沸出就行,边加边搅拌,加完后立即移至冰水中,加速其冷却。

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为什么加完氧化汞后要立即移至冰水中,一般是用玻璃器皿配液,那器皿不会破碎吗?
如果自然冷却有什么不好?

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引用:
下面引用由sissi1232003/01/15 11:31pm 发表的内容:
为什么加完氧化汞后要立即移至冰水中,一般是用玻璃器皿配液,那器皿不会破碎吗?
如果自然冷却有什么不好?
器皿不会破碎的,自然冷却的效果没有立即冷却的好。冷却的目的是不让氧化汞氧化过了。
其实不及着用的话,不加氧化汞也行。待苏木素自然氧化。[室温不同,氧化的时间也不同,一般需要三个月左右,用前过滤加冰醋酸。这种方法用的时间比较长]

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引用:
下面引用由wzy2003/01/17 10:08am 发表的内容:
配1000ml的染液,用3000ml的锥形瓶就不会溢出。
嗯,同意!
和我一样. :em17:  :em17:

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如果配出的沉淀多,是怎么回事?是不是加氧化汞的时候太快了?

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请问:加氧化汞一点点.这一点点是多少.可不可以量化?

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半氧化苏木素氧化汞加常规量的一半甚至1/3即可。

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其实我曾看到过好几篇关于改良Harris苏木素的配方了,好象大家的意见还不太一致.有的侧重在量上的改变,有的侧重在配置时时间的掌握及温度的控制。究竟怎样的才是最好的?

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