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请教关于冰冻切片的固定问题

请教关于冰冻切片的固定问题

我目前在做老鼠视网膜的矢状面冰冻切片,由于所需量较大,我们事先将新鲜取出的老鼠眼球用甲醛固定PBS缓冲,然后再根据需要取出做冰冻切片,现在有几个问题
1.今天分别做了几张10个UM 8UM 5UM的冰冻切片,发现片子相当容易脱片,是否是我没有固定的缘故,请问切好的冰冻片是否需要固定液固定,哪种比较好?

2.我发现镜下的细胞结构有些固缩,是否是事先用固定液固定的结果,如果采用新鲜组织的话做冰冻切片的话,又担心视网膜的脱离以及矢状面的位置不正,请问有什么好的方法么??
谢谢!

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请教关于冰冻切片的固定问题

新鲜取出后,先做冰冻切片,再放入甲醇里固定,就不会脱片了.

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丁老师 是甲醇还是甲醛??

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请教关于冰冻切片的固定问题

我们用酒精

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请教关于冰冻切片的固定问题

我查了一些资料 有用甲醇固定的也有用多聚甲醛固定的 也有用纯二甲苯或者酒精固定的
我想问下 如果是想防止脱片的话 应该在甲醇里固定多少时间为宜?
谢谢

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5分钟就行了.

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请教关于冰冻切片的固定问题

好,我去试试看!
谢谢丁老师

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也可用冷丙酮(4度)固定10至15分钟。

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我们是用酒精固定的:em02: 时间是5分钟内!!!  :em14:

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