鱼越龙门

请问:免疫组化浓缩试剂的稀释方法:用PBS缓冲液还是Tris缓冲液? 盼回复,多谢!!

xiafeng

PBS缓冲液还是Tris缓冲液,去认为都不是很合适啊，放置时间不久啊，建议用抗体稀释液！

鱼越龙门

Sample Text多谢！现配现用可以么？抗体稀释液需要专门订购么？可以配置么？

喜力

需要专门订
不过用的少的话就不值得了

用PBS可以保持7天。我依稀记得。

鱼越龙门

slides are in sterilizion chamber (Et眉v) in  one night
Depaarfinizatin, dehidratation
H2O2-methanol (3%) 25 minute
wash with distile water
wash with PBS
Microwave citrate buffer 750 w 5 dk
Microwave citrate buffer 500 w 5 dk
Microwave citrate buffer 350 w 5 dk
wash with PBS
primer antichor 1 hour
wash with PBS
seconder antichor 20 minute (biotinylated link, 1/50 dillusion)
wash with PBS
strepavidin 20 munite
wash with PBS
DAB 15 minute
distileted water
hematoksilien
flow-water
alchol-ksilol- shutting
我有些看不懂,有哪位破译!!!

shanghainese

你先用英汉字典一个字一个字翻译.
完后我帮你改.

鱼越龙门

1.标本予热过夜
2.?
3.3%双氧水浸泡25分
4.蒸馏水洗
5.PBS液冲
6.微波炉高温 5分? 中火5分/低火5分?
9.PBS 液冲洗
10.加一抗孵育一小时
11.PBS 液冲洗
12.加二抗20分,(生物素酰化物,1:50稀释.)  
13.PBS 液冲洗
14.?
15.PBS 液冲洗
16.显色15分      时间是否太长啊!!!
17.蒸馏水洗
18.苏木素复染
19自来水冲
20.酒精分化,封片
还有我用的一抗,为抗人NF-KAPPAB/P50抗原免疫组化多克窿抗体.二抗是否应选抗人的匹配,因为没有配套试剂盒,二抗用的是　：　Biotin-conjugated second           三抗是               KIT-0305-13
               　　　　Antibody(Goat anti-MS/Rb)                                 Streptavidin-Peroxidase
是否影响结果？多谢！！

[ 本帖最后由 鱼越龙门 于 2007-9-3 23:06 编辑 ]

shanghainese

1.标本予热过夜                                      1.  切片放在灭菌柜里过夜
2.?  Depaarfinizatin, dehidratation             2.  应为Depaarfinizatin, rehidratation 脱蜡,复水
3.3%双氧水浸泡25分                                  3.  3%双氧水浸泡25分 (只需 10 分钟)
4.蒸馏水洗                                            4.  蒸馏水洗
5.PBS液冲                                                    5.   PBS液冲
6.微波炉高温 5分? 中火5分/低火5分?         6.   微波炉高温 5分 中火5分/低火5分
9.PBS 液冲洗                                          9.   PBS 液冲洗
10.加一抗孵育一小时                                  10. 加一抗孵育一小时
11.PBS 液冲洗                                          11. PBS 液冲洗
12.加二抗20分,(生物素酰化物,1:50稀释.)    12. 加二抗20分, (生物素标记的, 1:50 稀释 )   (应为biotin conjugated/biotinylated)

13.PBS 液冲洗                                          13.  PBS 液冲洗
14.? strepavidin 20 munite                           14.  应为streptavidin-HRP(辣根过氧化酶标记的链霉亲和素)

15.PBS 液冲洗                                          15.  PBS 液冲洗
16.显色15分      时间是否太长啊!!!             16.  DAB显色15分钟 太长. 5分钟足够.   
17.蒸馏水洗                                                   17.  蒸馏水洗
18.苏木素复染                                        18.  苏木素复染
19自来水冲                                                  19.  自来水冲
20.酒精分化,封片                                      20.  可能是脱水,封片

这个protocol 是从哪儿来的? 是从南非来的吗? 怪字连篇.
其次,我不会用这个protocol.
第三,你用的为抗人NF-KAPPAB/P50抗原免疫组化多克窿抗体. 你看看一抗是由哪个动物产生的. 二抗应选Biotin -conjugated 抗那个动物的抗体.

鱼越龙门

再次感谢！
我最近一个月作了几次试验，均失败了．因为这个标记在国内银屑病方面做得少，从外文文献看到图文并貌的文章．故选做此标记．因为没有经验，联系到作者，具体哪国我到没问及．是他回复的此方法．版主觉得不可行么？里面确实有的差别挺大～～
３％双氧水浸泡２５分钟与１０分钟有何区别？
我仔细看过NF-KAPPAB/P50的说明书，没提到是哪个动物来源的．我二抗怎么选呢？我科用的山羊／兔抗小鼠．
并且二抗，三抗均按１：１００稀释．用ＰＢＳ　液（包括一抗）稀释．有影响么？
希望尽快达到预期实验结果啊

鱼越龙门

ＴＩＴＬＥ：Nature of cell kinetics in psoriaticepidermis

ＭＥＴＨＯＤＳＷ：: The study was performed in skin specimens of 25 patients
with psoriasis vulgaris and a control group of 10 individuals without
a skin disease. Biopsy specimens from lesional and normal skin were
analyzed by immunohistochemical method for expressions of Ki-67,
Bcl-2, terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP-biotin
nick-end labeling (TUNEL), tumor necrosis factor alpha (TNF-a) and
nuclear factor kappa B (NF-kB). In addition, densities of mast cell
infiltration were also investigated.