戎锡云

利用盖玻片染色盒进行染色和封片,可以提高染色效率十余倍,可以提高封片速度3倍或更高


[ 本帖最后由 戎锡云 于 2008-5-20 21:36 编辑 ]

戎锡云

盖玻片染色盒的制作与应用
1
1 目的
1.1 减少二甲苯危害
1.2 降低工作液损耗
1.3 提高安全性及效率
2 制作
2.1 材料准备
2.2 制作步骤
2.3 一些特殊的处理和要求
2.3.1 不同大小的盖玻片
2.3.2 如何微调调整染色盒高度
2.3.3 染色盒编号区别
3 使用
3.1 贴片及染色和封片的步骤
3.2 使用中要注意的一些细节
3.2.1 弯嘴小镊子夹玻片贴片
3.2.2 贴片留边1毫米
3.2.3 持盖玻片的指法
3.2.4 养成习惯,固定贴片放置方向
3.2.5 吸水纸吸去多余水分
3.2.6 贴片后即写标签,经常性复查
3.2.7 充分除去上游的工作残留液
3.2.8 高效率的封片方式
4 讨论
4.1 染色效果:与常规方法染色的比较
4.2 玻片的表面积比较:工作液残留面积比较   比值约为2~3:１
4.3 体积与容量比值:相对空间利用率提高了十倍.
4.4 去残液程度:甩动下安全程度比较

实物图片：下图中的两种盖玻片染色盒分别适合24X24  和24X36两种盖玻片染色用.只要增加包埋盒数就可使用于不同规格的盖玻片了.详细制作过程点击本链接至



[ 本帖最后由 戎锡云 于 2008-5-22 22:37 编辑 ]

戎锡云

1 目的
1.1 减少二甲苯危害
二甲苯因其价格低,透明效果好,目前仍被国内大多数的病理科室使用。由于仪器设备条件有限，在制片过程中,技术操作人员或多或少都会受到这种有害物质地影响.为了减少二甲苯的影响，操作室内必须保证良好的通风。同时，作为工作者，我们在实际工作中也要想办法尽可能地减少与二甲苯的直接接触。


常规制片中,退蜡和封片这两个步骤中使用到二甲苯。因退蜡过程中,因为二甲苯直接暴露于空气的时间很短,其影响可以忽略不计.但封片过程中,由于要保证组织的湿润状态，所以操作者不得不较长时间地暴露在二甲苯前。.如果封片数量较大,这种被二甲苯"熏蒸"的时间会更久
1.2 降低工作液损耗
牋
在常规制片中,酒精的损耗是相当大的.为了保证不同梯度的酒精浓度维持正常,经常性地测量及更新成为技术工作地重要部分.

影响酒精浓度变化的除了因组织脱出的水分稀释和少量的挥发影响外,最重要的原因就是来自上游的残留液.所以,如何减少残留液就成为降低工作液消耗的一个关键问题.

影响残留液多少的原因大致有以下三点:1,与工作液接触的总表面积.2,去除残留液的方法和强度.3,染色装置的结构及材料质地.
牋
我们在实际操作中,往往都是通过静置和抖动的方式除去经可能多的残留液.但是由于
1.3 提高安全性及效率
因为一般的染色架(栏框)是半开放的,所以在染色过程中,特别是通过晃动去除处残留液,用流水漂洗浮液时,均有可能造成丢片和掉片的问题.
在封片中,为了保证"湿封",载玻片必须一张一张的封胶,这种封片方式不仅效率底,而且操作者也不得不长时间地暴露在二甲苯的危害中.

[ 本帖最后由 戎锡云 于 2008-5-20 20:56 编辑 ]

戎锡云

1 制作(欲看实物图片及制作过程图片,可点击"安全迷你染色盒(盖玻片染色盒"
1.1 材料准备
制作这种盖玻片染色盒的工具及材料都是我们手边容易获得的.1,尖嘴钳一把.2,回形针数个.3,小刀一把(手术刀片也可).4,一次性塑料包埋盒数个.5,铅丝一小段.
1.2 制作步骤
步骤一:用尖嘴钳铰直数根回形针.
步骤二:用小刀将包埋盒的网格样底部切割去,只保留距长边约1毫米的边缘部分,则包埋盒已成为具有十多个横格的框架.
步骤三:将数个包埋盒按相同的方向垒叠一起,用铰直的回形针钢丝穿过包埋盒两端边框上的小洞,将其进行固定(最底部的包埋盒可以不用处理).一般根据盖玻片的长度大小来决定使用包埋盒的数量.

步骤四:在已成形的染色盒的顶和底加上包埋盒盖,一个小巧的盖玻片染色盒就制作完成了.
步骤五:为了防止在染色过程中,包埋盒的盒盖松动或脱落,利用回形针钢丝制作成有弹性的卡子,使其能正好卡住染色盒的顶盖和底盖.
步骤六:为了便于多个染色盒同步操作,我们也可将两个或者更多的染色盒固定在一起.这样,即使切片数量几十个甚至上百,也能一次性完成染色等过程.
步骤七:为了便于取放多个染色盒,我们可以用较粗的铁丝制成勾架,一端勾住染色盒的卡子,一端用于操作者握取.
1.3 一些特殊的处理和要求
在实际制作和应用染色盒时,我们还可能会遇到一些问题.下面就一些常见的问题和解决办法进行介绍.
1.3.1 不同大小的盖玻片
国内最常使用的一般都是宽固定为24毫米,而长度不等的盖玻片.所以,在制作盖玻片染色盒时,我们可以根据所使用的盖玻片的长度来决定使用包埋盒的数量.
1.3.2 如何微调调整染色盒高度
制作染色盒过程中,可能会遇到"增一盒太多,减一盒太少"的问题.为了微调包埋盒内部空间的高度,以更为精确地适应不同长度的盖玻片,我们可以采用一下几种方式解决:
(1)对盒盖进行加工.盒盖的内侧面周边都有一圈约1毫米高的边框隆起.用小刀将长边两侧的隆起削去,则染色盒内部空间的高度就可增加一毫米.
(2)调整包埋盒排列顺序.为了微调染色盒内部空间的高度,我们可以将最底部的包埋盒翻转后再与其它包埋盒一起固定,这样,染色盒的底部就可以用染色盒的盒盖做底.对盒盖进行处理后,即可使染色盒内部高度再增加1毫米.
(3)如果有必要,还可以利用包埋盒盖一次性增高3至5毫米.可以将盒盖的网格部分全部切除,然后垫在包埋盒之间一起用铅丝固定即可.
1.3.3 染色盒编号区别
当使用了两个或两个以上的染色盒时,我们必须对染色盒进行标记.可以用尖锐的东西在染色盒的侧面刻记上序号(如ABCD,或1234等),以方便封片时识别.

[ 本帖最后由 戎锡云 于 2008-5-20 21:32 编辑 ]

戎锡云

1 使用
1.1 贴片及染色和封片的步骤
使用盖玻片贴片,染色和封片,其过程与使用载玻片时是一致的.但是因为盖玻片更小,更薄,更易破损,而且不便标记,所以在具体使用过程中需要特别的仔细和认真.为了防止发生意外,我们要特别注意操作过程中的一些细节.
1.2 使用中要注意的一些细节
1.2.1 弯嘴小镊子夹玻片贴片
因为盖玻片小而易碎,在贴片时适合用小弯嘴镊操作.用镊子夹取盖玻片的一角进行捞片,对于较大的切片组织,可以将其推至展片池边缘处操作.
1.2.2 贴片留边1毫米

用盖玻片贴片时要尽可能将组织切片贴于中央处,组织距盖玻片边缘至少应保留1毫米的距离,以防止后续的步骤中边缘部位组织被刮损.
1.2.3 持盖玻片的指法
放置已贴片的盖玻片要特别小心.先将盖玻片夹于右手拇指与示指之间.注意:夹取和放置时手法要轻柔,手指应与玻片的平面垂直,以便能在目视小准确插放.
1.2.4 养成习惯,固定贴片放置方向
左手自烘片箱中拿出暂时去盖的染色盒,右手持玻片准确插入染色盒的档位中.为了避免混乱顺序和方向,在插片时应确定固定的方向和顺序,从起始端逐个放置.为了避免位于最边上的玻片组织被框沿擦损,可将其反向放置.这一片在封片时要特别注意调整盖片方向.
1.2.5 吸水纸吸去多余水分
为了调整组织位置,除去玻片上多余的水,在插片前可将盖玻片的下部边缘与吸水纸轻柔接触数秒.
1.2.6 贴片后即写标签,经常性复查
因为盖玻片上不能刻写标记,所以在贴片放置时,保证标签编号与切片顺序绝对一一对应,就是一个特别重要的事情了.
为了保证绝对不出错,在贴片和插片放置时要绝对做的一下几点:
(1)每次插入一片组织后就必须将此切片的编号进行登记.
(2)保证"三个序列的对应".首先是染色盒按照固定的方向和顺序插放.其次是在标签纸上书写编号的顺序.再次是切完后蜡块放置排列的顺序.
(3)在贴片过程中,应当有意识地不断复查染色盒中的切片数和标签纸上已登记的标签数,以及时发现可能由于疏忽超造成地错误.
1.2.7 充分除去上游的工作残留液
因为染色盒是封闭性的,体积小重量轻,使用时即安全又轻巧方便.自制的夹子能够防止盒盖脱落,即使剧烈的甩动也不会发生飞片和碎片.用吸水纸包裹后甩动染色盒,可以达到最大去残留液的效果.
1.2.8 高效率的封片方式
牋
用这种染色盒的一个明显优点就是封片效率高.经过对比,在完成相同的封片数量时,这种方法所用的时间只是常规方式的三分之一左右,而且,随着贴片的数量增多,这种批量封片的高效率优势就越明显.

具体操作方法是:首先将载玻片放置于晾片板上,按照切片时登记的顺序依次将标签纸贴在载玻片上.再将树胶依次滴在晾片板上所有盖玻片上.自透明二甲苯中取出染色盒.可在左手掌中垫上吸水纸裹住染色盒,甩动几次,以除去滞留的二甲苯液.去盖后,右手持细弯嘴镊按顺序夹取出盖玻片依次覆盖在载玻片上.

[ 本帖最后由 戎锡云 于 2008-5-20 19:41 编辑 ]

戎锡云

1 讨论
1.1 染色效果:与常规方法染色的比较
因为染色过程与常规方法并无不同,所以染色效果与传统方式的并无区别.
1.2 玻片的表面积比较:工作液残留面积比较
与载玻片比较,盖玻片表面积仅为其二分之一到三分之一,所以可黏附液体的表面积明显减少,从而降低了残留液量.
1.2.1 比值约为2|3:１
1.3 体积与容量比值:相对空间利用率提高了十倍.
经过测量和计算,理论上,盖玻片染色盒的相对体积与容量比值仅为载玻片染色栏的10到13分之1.也就是说,在占用相同的空间的条件下,前者的工作效率是后者的十多倍.在实际应用中,特别是对于切片数量上百的制片过程,这种盖玻片染色盒的高效率优势更加明显.
1.4 去残液程度:甩动下安全程度比较
与常用的载玻片染色框比较,载玻片染色盒有着明显的特点.因为染色盒为闭式设计,且重量轻,可充分甩动以除去残留液,不会发生失手和飞片的意外.应为体积小,外形方整,便于用吸水纸吸附残液.这些特点可以使来自上游的残留液减少到最少限度.

戎锡云

质量(近似值,计算方法:测量多个材料总质量,算其平均值,测量天平可精确到0.5克)
包埋盒: 2.5克/个            
                                       24X24盖玻片染色盒质量: 10克~15克(加上固定用铅丝重量)
                                       24X36盖玻片染色盒质量:14克~20克(加上固定用铅丝重量)



载玻片: 5.4克/个
盖玻片:  24X24型  0.22克/片
               24X36型  0.31克/片
金属制染色架(立式20片装):  36克/个


装满载玻片后, 载玻片共重20片装)            108克+36克
                                         (30片装)             162克+不祥
                                         (60片装)              324克+不祥

自制盖玻片染色盒,每盒可装14片,可多个染色盒组合成一个整体进行一次性染色等过程.
                 盖玻片染色盒装满盖玻片的重量(每盒均可满载14片计)
                        24X24型染色盒:     单盒装满:  盖玻片重14片X0.22克+染色盒重(10~15克)  =   约为13~19克
                                                      整体双盒装                     28片X0.22                   (20~32克)  =         26~38克
                                                      整体八盒装                   112片X0.22                 (80~128克)=         105~153克

                        24X36  
                                        略

说明:   采用盖玻片染色盒不仅能使染色支架占用的空间缩小1/5~1/10,  满载后染色架(盒)重量也有及明显的差别,就双盒装染色盒而言,染28片时,总重不到40克, 而常规用的金属染色架(20片装)则满载重为140多克.而且这种轻便的优势随着染色切片的数量增多而快速扩大.
    又因为染色盒是密封的, 轻巧加安全,可以放心大胆用力甩动除去残液,使染色工作液使用的更久,从而节约了人力和酒精的使用量.一举数得.

[ 本帖最后由 戎锡云 于 2008-5-21 14:13 编辑 ]

戎锡云

[ 本帖最后由 戎锡云 于 2008-5-22 00:39 编辑 ]

戎锡云

先说实践的:   我本人使用自制的盖玻片染色盒已有近半年,与以前用载玻片染色架相比,在封片效率上有特别明显的优势----效率特高!!!!   以前要花近半小时来封片,现在只需六七分钟,而且可以自由调整切片组织位置到载玻片上最佳部位.
只有实际使用了的人才会得到其中的好处-------效率高,时间少,自然吸-毒就少了!

再来从理论上分析为什么这种制片方式封片效率高的原因:
   我们可以把一张玻片封片的过程进行分解.包括三步:   
                                第一步:    取载玻片 ,  
                                 第二步:   滴树胶
                                 第三步:   盖盖玻片
    在实际操作中(指手工封片),为了保证制片质量,必须要"湿封", 所以,我们一般只能将染色架放在二甲苯罐中浸泡着,取一张载玻片,滴一滴胶,再盖一张盖玻片, 就此完成一张,收起摆好.
     也就是说;在传统染色方式中,封片过程是每封一张玻片都要连续完成第一,二,三步.周而复始,直到封完所有玻片..
    再来看使用盖玻片染色盒时是如何封片的吧:
          第一步: 可将一二十张载玻片摆放在晾片板上,先行贴上标签.
          第二步: 一次性将晾片板上的所有玻片滴上树胶.
          第三步:自二甲苯中取出染色盒,打开盒盖,用镊子夹取封片,重复夹片封片,直至完成.

从以上的描述中,你能看到,使用盖玻片染色盒封片的步骤与传统的有本质的区别:
       传统染色架制片时,封片的过程是''对每张玻片都要连续完成"取片-滴胶-盖片三个步骤"
       而用盖玻片染色盒制片时,封片过程则是"对大量玻片统一进行取片-滴胶-盖片三个步骤"
        因为后者应用的是"流水线"批量式操作,所以效率更高,质量更好!

[ 本帖最后由 戎锡云 于 2008-5-22 22:39 编辑 ]

dingwei

这种封片方法很早就有，现在就要用在细胞爬片上，我做了也不少，个人感觉有非常不方便的地方：
一、是玻片容易碎，做几片还好，如果大批量做，一不小心就会碰碎或夹碎，全过程要小心翼翼，一不小心就要重切、重染。在这里浪费的人力物力会非常不值。我不相信你做到现在没有碎的。
二、是不容易标记，万一换错了没法辩认，人不可能一辈子不出错，但这样的差错对病人的损失是不能挽回的，这个方法在很大的安全隐患。
三、几年后万一想重染，非常不方便，很容易把切片掀碎。
四、对于能提高封片速度，可能有，我并不这样认为，你是把传统的时间给分散了，比如要把片子都放好，滴封胶都要放在封片时间里，这和你把传统的玻片从二甲苯里拿出来差不了多少时间。为了节省这点封片时间来换前面诸多不便，不值。而且，我不知你二十分钟内传统方法能封几张切片？
     所以，我不喜欢这个办法。
     但是，你发明的包埋盒染色方法对于必须用盖玻片染色的技术来说，无疑是一个福音，值得推广。