fydapg

丁老师：

       我做的是小鼠胚胎脑组织切片！
      我用的伊红配方是沉淀酸化伊红Y乙醇液，但是最后封片观察发现，伊红染色特别淡，请丁老师帮助解决，谢谢！我的切片浸入伊红染液的上一步是在95%乙醇浸泡3分钟。
------------------------
------------------------
二甲苯1-------------------------8 min
二甲苯2-------------------------8 min
无水乙醇------------------------2 min
95%乙醇-------------------------2 min
75%乙醇-------------------------2 min
自来水洗
苏木精浸染----------------------5——10 min   Gill改良苏木素液
自来水洗
1%盐酸乙醇分化---------------数秒     
自来水洗                                    
50℃温水蓝化-------------------1 min
自来水洗
95%乙醇-------------------------3 min
伊红染色-------------------------3——10秒   沉淀酸化伊红Y乙醇液
自来水洗
脱水——透明——封固：
95%乙醇--------------------- 2秒
无水乙醇-------------------- 5秒
无水乙醇--------------------3~5秒
无水乙醇--------------------1min
二甲苯1---------------------5 min
二甲苯2---------------------5 min
中性树胶封固、晾干（制片流程结束）

丁老师，我最后发现伊红染的很淡，苏木精染的还可以；
还有切片从伊红染液里出来后，要不要经过水洗这一步骤？还有我这染色步骤有没有哪地方需要改动的？

[ 本帖最后由 fydapg 于 2008-9-21 06:39 编辑 ]

dingwei

可以不洗，应该经过85%酒精脱水

fydapg

丁老师，能否说清楚点，哪一步要加入85%酒精，大概脱水多长时间？

liujun0304

liujun0304

不知你染的事什么组织?
我个人觉得伊红时间有点短！可延长到25秒左右!
还有后面的无水乙醇的时间有点短，短了后面的二甲苯不能进入组织，对片子的染色效果又影响！
建议：伊红  20~25秒
   95%  1min
     95%    2min
   100%    2min
   100%  2min
……

fydapg

我染的是小鼠胚胎神经组织。请问伊红染色时间应该是怎么样，以前一位老师说伊红染色时间若超过10秒，会太红的，最后片子会看不清的。

dingwei

染色不是以时间来控制，试剂配制与使用时间不同，都会有差异，只能根据你自己的深浅调整。深了时间短一点，浅了时间长一点，一般来说，伊红染好后应该用85%酒精分化一下，深了时间洗长一点可以去除。深浅时间都是由片子决定的，你应该自己试一下。

fydapg

伊红染好后用85%酒精分化一下,后面一步直接进入95%乙醇脱水吗？

scncoyzh

我觉得是伊红时间的问题,你可以自己多染点试下,以一定时间为基础,增减时间,然后看效果,再自己选择比较满意的染色时间.