lovepiggy

正在做兔眼的石蜡切片。遇到问题，请有经验的老师帮助：

1）固定： 我已经用针从后房注入10%福尔马林，是否还需要从角膜处刺入注入前房？（前后房应该是相通的，所以不需要？）

2）脱水： 我在眼球后部两侧剪了2个洞，以方便液体进出。这样足够了吗？（我用的是自动processor）是否还需要每次用针往后房注入酒精？我在担心脱水的酒精不能很好地进去。

3）二甲苯（hisoclear)和浸蜡：也是同样的问题。眼球后部的二个洞是否已经足够？ 二甲苯和蜡能进去吗？

4）我已经试验过一次，当时只剪了一个洞，用的自动processor,结果出来时，眼球腔里面没有蜡，好像只是二甲苯，吸干二甲苯后，做成蜡块，切片时因为中间是空的，眼组织切不到。

5）另外，晶状体一切就碎，拿不到切片，怎么办？

6） 我的处理程序如下：50%， 70%， 90%酒精 各一小时；100%  酒精， 2 遍，各1小时； 100%酒精和histoclear体积1：1， 4小时；histoclear第一遍4消失，第二遍2小时； 石蜡， 2遍， 各1。5小时，62度。

请各位帮我看看我的问题所在，如何解决？谢谢。

bagelo

首先请问，你是想要切完整的眼组织吗？角膜，晶体，视网膜，巩膜，视神经全要切到吗？如果是这样，那么眼球取下来先要完整固定，最好是4%多聚甲醛。固定24小时后，把平行视神经的两侧巩膜切掉一小部分，即开窗。使眼球两侧通透。然后更换固定液再固定24小时，然后脱水。建议手动脱水，因为要时刻观察眼球是否完全浸入液体，眼球内很容易有气泡，导致脱水不完全。时间大概是70％2小时，80％2小时，95％两次各2小时，100％两次各2小时，二甲苯两次45分钟和30分钟，浸蜡三次，分别为30分钟，1.5小时，1.5小时。在浸蜡和脱水各个步骤中，每间隔一段时间手动提拉组织，使组织在液体中脱水浸蜡充分。眼球是比较特殊的组织，有很软的视网膜部分，又有很硬的晶状体部分，所以脱水和浸蜡时间比一般组织要长些。切片时就沿着开窗的面切就可以，切深一些就应该能切到视神经的面了。
其次，如果你不需要完整的眼球，那可以把眼球取下来固定24小时后，把前节和后节分开来取材，前节就可以用自动脱水机脱水了，但是后节是个碗状的，也是用手动的比较好，而且要注意，比较容易网脱。

lovepiggy

实际上我只要角膜，虹膜，结膜和晶状体，不需要视神经和视网膜。

这几天我一直在试，非常赞同应该手动脱水，浸蜡。也在两侧开了较大的窗，这样比较容易液体进出。现在效果好多了，几乎可以拿到完整的切片了。

以后我会注意您的提醒，经常拉提，确保排出气泡。脱水和浸蜡的时间也会相对延长，希望可以得到更好的切片。

非常感谢您的帮助。

bagelo

不谢 加油