切片易褪色的原因
制成的组织切片,其染色结果有的能持久保存,有的则易褪色,其常见原因可归纳为两大类: ①染料的性质及染料与组织的作用,染料与组织所形成的色淀结合牢固,其染色结果就能永久保持; ②制片过程中的原因致切片易褪色。
1 组织处理不当 ,固定不佳或固定时间过久(酸化) ,固定液pH 值不适宜; 固定较久的组织,特别是用含铬酸、重铬酸钾及锇酸等固定的组织,脱水前未将组织内部的固定液经流水彻底冲洗除去,影响了细胞核染色和保存。
2 染色前处理失当
3 染色时处理失当 染液及所用试剂酸碱度不适宜是一个很常见的重要原因。如HE 染色时,用碱性过大的溶液返蓝,就易引起胞质褪色,而用pH 715～8 的弱碱性溶液返蓝并经自来水彻底冲洗,就不易引起切片褪色。在配制伊红染液中,若加入促染剂冰醋酸过多,染液混浊甚至沉淀,短时间就失效不能再用,染色结果保持时间很短,染色后切片极易褪色。因此每100 ml伊红染液加1～2 滴冰醋酸较好,如摇动有大量泡沫浮在液面较长时间不消失,说明染液内冰醋酸过多,反之,泡沫少很快消失。
4 染色后脱水、透明失当
5 封固剂酸化 封固剂多用二甲苯作为溶剂,时间过长时其中的二甲苯逐渐氧化,生成苯甲酸和邻苯二甲酸而呈酸性,可导致苏木精褪色。故封固剂的酸碱度要适宜,尽量应用中性封固剂。我们在封固剂中放少量大理石或无水碳酸钠,置低温干燥箱内,充分搅拌待澄清后,取上清液备用较好。
6 封固时天气潮湿 多雨、湿气浸入、组织切片内混入水分含有气泡、封固剂较稀或用量少、盖片小或不平、盖片位置不适当或被移动等,不但可致切片染色模糊不清,而且切片易褪色。
7 染色后长期光照 封固剂及切片长期置于日光或强烈灯光下,尤其是暴晒于日光下,易引起氧化变酸致切片褪色。
另外,将封固后的切片加温烤干或室温过高时,均能加速封固剂氧化,易引起切片褪色。
8 载、盖玻片处理不当 不呈中性。
[ 本帖最后由 6504339 于 2009-9-17 22:32 编辑 ]
