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请教丁老师关于冰冻问题

今天用使用1周的哈瑞氏苏木素染冰冻切片,95%乙醇固定,效果会更好,但是马上固定,对乳腺病、卵巢囊肿等细胞较稀疏的组织,我科经常出现脱片造成片子不完整,按丁老师说,不能在空气中停留数秒,但因为脱片的原因,我们不得不用电吹风稍吹几下才固定,不知同行们会不会出现脱片现象?

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冰冻切片脱片的原因主要是细胞成份少的组织:如胶原含量较高的组织、软骨组织等,如果切片厚就容易脱片。干燥后固定,尽管所谓的切片完整了,但这些脱的组织并无多少诊断价值,而真正诊断需要的细胞核却发生了退变。如何在细胞核不退变的情况下把这二种组织全部不脱,是解决问题应该思考的方向,而不是仅仅只是不脱片。
解决方法:
1、把片子切薄(5-6微米),切平整,99%的片子都不会脱,我们很少会有脱的片子。当然不是切片机刻度多少就是多少厚,刀要快,冷冻温度要适中,还要在切片技术上下一点功夫。
2、在95ml甲醇或95%乙醇内加5ml冰醋酸,可以减少脱片,特别如甲状腺胶质。
3、苏木素染色不要加热,一般室温1分钟即可。
4、玻片要干净,不要用手抓在需要粘组织的区域。
       当然,干燥技术并非完全不能用,当组织含水量较高的组织:如脑组织、软组织肿瘤,如果立即固定,会使间质收缩成网状。此时,可以做二张切片,一张快速固定,诊断医生可以看细胞核的结构;另一张略干燥,可看完整的组织结构。
本人观点纯属个人偏见,希望大家独立判断,正确引用!

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我切5微米,苏木素室温染同常规时间,稍短些,不知怎么搞的,我这边95%乙醇加少量冰乙酸,核会朦的,因此我都不加,其他条件都一样,就是细胞成份少的组织会掉片,看来以后要按丁老师说的去做,切二片染给医生看,另外,再请教丁老师,哈瑞氏苏木素配好不用,用瓶子装起来,一个月内会有氧化膜吗,

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哈瑞氏苏木素配好不用,用瓶子装起来,一定会有氧化膜,这是正常的。
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谢谢丁老师,那吉尔苏木素也有吗,随着时间延长,即使不用,染色力也会减弱吗?

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只要有氧化就一定有,吉尔苏木素只是氧化剂不一样,氧化强度不一样,出现的时间不一样。随着存放时间的延长,着色力也越来越强,但时间过久后,苏木素过氧化,即使不用,染色力也会减弱,甚至不能用。
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谢谢丁老师!

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