恒温冷冻切片
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恒温冷冻切片
将组织在恒温冷冻切片机里切片。冷冻腔内的温度一般设置为-18至-25℃,根据不同组织调节不同的腔温,平时应将冷冻头放置于冷冻台上。冷冻切片机应长期处于恒温冷冻状态。
(1)、当冰冻组织取好后,有速冻开关的机器可先将开关打开,再在冷冻头上放少量的OCT(Optimal cutting temperature solution 是一种多糖物质,为乙二醇和树脂的混合物,)或羧甲基纤维素,也可用普通胶水代替,放上组织,速冻。有条件的单位最好先用液氮冷冻
(2)、待组织冻结后,将冷冻头装到切片机上
(3)、粗切,修出切面细切几张,用毛笔刷去刀上组织片
(4)、放下抗卷板,开始切片,切片厚度一般为5~6微米,切出的片子用载玻片贴附后立即放入(95ML甲醇+5ML冰醋酸)中固定,固定时间为10~20秒
(5)、水洗
(6)、苏木素1分钟
(7)、水洗
(8)、盐酸酒精分化1秒钟
(9)、水洗
(10)、温水蓝化
(11)、伊红2~5秒钟
(12)、梯度酒精快速脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。