骨组织免疫组化求助
本人刚做免疫组化，做的是兔骨（痂）组织的TGF，但目前存在严重掉片问题，试做了8张片子，中途就脱完了一张，退出染色，最后又完全脱掉了2张，成为白片，最终得到5张片子，组织已经少的可怜，染色背景一片黄染，应该就是所说的非特异性染色吧。整个染色过程按照说明书上进行。抗原修复使用热水煮沸，在修复液中修复。请问这些问题是什么原因，怎么解决？（载玻片事先用肥皂水洗、酸+重铬酸钾浸泡过夜，蒸馏水洗，酒精浸泡过夜，绸布擦干，后多聚赖氨酸涂胶。）望各位组化高手给予指点迷津，并能上传该生长因子阳性染色的图片。谢谢，感激不尽。
我买的博士得的试剂，按照SABC法进行的，大致步骤如下：
1)脱蜡、水化。
二甲苯I[15-25分钟]、二甲苯II【10-15分钟】
滴度酒精水化各5分钟
2蒸馏水浸洗两次2-3分钟。
3)用蒸馏水配置新鲜的3%H2O2，室温封闭10-20分钟，蒸馏水浸洗3次。（此时已经开始出现脱片。）
4)抗原修复（切片置于盛柠檬酸液的容器中，并放置水中煮沸后关闭电源，5-10分钟后再次煮沸断电，重复1-2次）。后将容器连同切片取出放置室温冷却.
5)PBS洗2分钟2-3次。
6)滴加封闭液，室温20分钟。甩去多余液体。PBS浸洗2分钟2-3次。
7)滴加Ⅰ抗, 4℃过夜
8)PBS洗三次每次3分钟。
9)滴加二抗, 37℃10-20分钟。
10)PBC洗3次每次3分钟。
11)滴加试剂SABC， 37℃10-20分钟。
12)PBS洗4次每次5分钟。
13)DAB显色：DAB显色试剂盒或者自配显色剂显色（镜下掌握显色程度）。
14)蒸馏水洗。苏木素复染5分钟、盐酸酒精分化、氨水反蓝
15)脱水、透明、封片、镜检。
整个石蜡标本及切片为我们医院的一个很有经验的主任技师制作。切片厚度为4微米。制作后HE染色效果尚可。现在最头疼为掉片问题太严重，也问过其他做骨组织的师兄，都说软组织掉片都有限度的，骨组织掉片国内外都没有好方法，能在我做的过程中找找原因，给给经验吗？最后的组织都掉的差不多了，没有可采集的图片上传，等等做做下批我再上传让你看看是否为非特异染色。急切希望给予答复，在此叩谢！
补充一下，我的组织展片捞片后即在70度烤箱中过夜了，整个染色操作过程也非常轻柔，清洗都是用浸泡。
